Ferramentas de biologia molecular para estudo da diversidade microbiana e caracterização de Staphylococcus aureus em laticínios orgânicos e convencionais no Estado de São Paulo

Resumo

O queijo é um importante alimento de origem animal e pode ser veículo de transmissão de patógenos. Um dos micro-organismos mais prevalentes em queijo é o S. aureus que possui capacidade para produzir enterotoxinas, formar biofilme e apresentar resistência a antibióticos e desinfetantes. Os objetivos do estudo são observar a diversidade microbiana; isolar, identificar e caracterizar molecularmente e fenotipicamente isolados de Staphylococcus aureus, provenientes de planta de processamento queijo tipo Minas frescal de produção orgânica e convencional; e avaliar a transferência horizontal de genes de resistência em biofilme. A partir das amostras provenientes de seis plantas de processamento de queijo tipo Minas frescal, três orgânicos e três convencionais será identificada a comunidade bacteriana pelo sequenciamento metagenômico do gene 16S rRNA, isolamento e identificação de S.aureus por análises fenotípicas e pelo gene nuc específico. Será realizado a caracterização de resistência das cepas frente a antimicrobianos (oxacilina, cefoxitina, cloranfenicol, clindamicina, eritromicina, penicilina, tobramicina, tetraciclina e gentamicina) pelo método de disco-difusão e a pesquisa de genes relacionados com a formação de biofilme (icaA, icaD, bap) e a produção de enterotoxinas (sea-see, seg-sej) será realizada por PCR. Para comparação molecular das cepas será realizado agr-type, spatyping, tipagem do SCCmec e PFGE. Serão selecionadas cepas com capacidade de formação de biofilme e com a presença do gene mecA para estudo de transferência genética do gene mecA em biofilme que será realizado no Department of Clinical Microbiology no Education and Research Centre Royal College of Surgeons na Irlanda sob supervisão da Dra. Deirdre Fitzgerald Hughes. (AU)