Identificação de novos fatores de virulência de leptospira envolvidos nos processos de adesão, invasão e resistência ao soro

Resumo

Espiroquetas do gênero Leptospira podem causar leptospirose, uma zoonose de distribuição universal. O gênero Leptospira inclui espécies patogênicas e saprófitas, classificadas em mais de 300 sorovares. Leptospiras patogênicas utilizam estratégias de virulência para colonizar uma gama de hospedeiros, mas os mecanismos relacionados à patogênese da doença ainda são pouco conhecidos. Até então, poucos fatores de virulência foram identificados em consequência do desenvolvimento recente de ferramentas genéticas que permitiram a avaliação de alguns mutantes em modelos animais. A interação da bactéria com moléculas do hospedeiro certamente contribui para os processos de colonização, invasão e evasão imune, mas apesar dos progressos alcançados na área, persistem grandes lacunas no que diz respeito aos mecanismos adotados pela bactéria para causar a doença. O principal objetivo desse projeto, subdividido em duas partes, é identificar proteínas de superfície de Leptospira que possam contribuir para a colonização do hospedeiro. Em estudos prévios feitos pelo grupo, proteínas de membrana externa da bactéria foram incubadas com moléculas do hospedeiro (proteínas da matriz extracelular e da cascata de coagulação assim como reguladores negativos do sistema complemento) pré-imobilizadas em esferas magnéticas. Os ligantes foram identificados por espectrometria de massas. Cinco proteínas contendo domínios relacionados à adesão, presentes apenas nas espécies patogênicas de Leptospira, foram selecionadas para caracterização. No subprojeto 1 essas proteínas serão produzidas em Escherichia coli e ensaios funcionais serão realizados para melhor caracterizar as interações observadas. No subprojeto 2, o envolvimento de duas proteínas moonlighting - enolase e GAPDH - na patogênese da leptospirose será avaliada. O interesse em investigar e explorar o papel de proteínas moonlighting como fatores de virulência em espiroquetas emergiu recentemente e nosso grupo é considerado pioneiro na área. Nesse projeto pretende-se caracterizar as consequências funcionais da interação do plasminogênio com a enolase de Leptospira e também avaliar se a proteína GAPDH desta bactéria apresenta atividades moonlighting relacionadas à adesão, invasão e/ou evasão imune. Dada a necessidade de se desenvolver estratégias preventivas que possam interferir nos mecanismos de invasão e evasão imune da Leptospira, a identificação e caracterização de proteínas envolvidas nesses processos são de fundamental importância. (AU)