Aplicação da técnica de sequenciamento do exoma para identificar mutações patogênicas na disgenesia gonadal parcial 46,XY

Resumo

A disgenesia gonadal parcial 46,XY (DGP XY) é uma condição rara e quase sempre esporádica. Caracteriza-se por ambiguidade genital com diferenciação testicular parcial e cariótipo 46,XY. Já foram descritas mutações no gene NR5A1 e em outros genes participantes da diferenciação gonadal, como SRY, WT1, SOX9 e LHX9, mas a maioria dos casos tem etiologia desconhecida. Atualmente, técnicas de sequenciamento de nova geração permitem a busca de variantes patogênicas em todo o genoma humano. O sequenciamento do exoma completo (whole exome sequencing, WES) possibilita a pesquisa de mutações deletérias na região codificante completa de um indivíduo, sendo empregada para estudo de condições de etiologia ainda obscura, como a DGP XY. Este projeto tem por objetivo investigar novas variantes patogênicas em pacientes com DGP XY buscando identificar a presença de mutações deletérias que possam ser a causa dessa afecção e, eventualmente, identificar novos genes envolvidos na diferenciação testicular. Nossa casuística será composta por trios de 4 a 5 pacientes e respectivos pais, cujas amostras de DNA serão fragmentadas e empregadas na construção de uma biblioteca de DNA. Após a adição de adaptadores e etapas de PCR em fase sólida com formação de clusters, será realizado o sequenciamento por síntese da plataforma Illumina, utilizando nucleotídeos terminadores reversíveis e fluoróforos. As sequências obtidas serão analisadas por bioinformática para detecção de variantes patogênicas em heterozigose ("de novo" ou herdadas da mãe) ou homozigose (herança recessiva). Essas variantes serão validadas por sequenciamento de Sanger e sua presença será investigada em um grupo controle de no mínimo 100 indivíduos. (AU)