Papel de cTXNPx e OPB na virulência e resistência a fármacos em Leishmania L. amazonensis e busca de novos fatores de virulência por proteoma comparativo

Resumo

Leishmania ssp. são protozoários parasitas responsáveis por um complexo de doenças conhecidas como leishmanioses. Apresentam duas formas principais: a promastigota flagelada no tudo digestivo do inseto vetor, e a amastigota no interior dos macrófagos do hospedeiro vertebrado. A sobrevivência e multiplicação da Leishmania no interior desses macrófagos devem-se à capacidade de evasão do parasito por meio de fatores de virulência. A análise do proteoma tem se mostrado uma ferramenta eficaz na identificação desses fatores. Estudo anterior de nosso laboratório comparou o proteoma de amastigotas de L. (L.) amazonensis obtidas de lesões de BALB/c e BALB/c nude para analisar o impacto de respostas T dependentes do hospedeiro na expressão de proteínas do parasita. Observamos que isoformas da oligopeptidase B (OPB) e de triparedoxina peroxidase citoplasmática (cTXNPx), sabidos fatores de virulência de tripanosomatídeos, estavam diferencialmente expressas. Neste projeto, pretendemos analisar a importância da OPB e da cTXNPx na virulência desta espécie obtendo e caracterizando parasitas superexpressores que serão utilizados em modelos murinos de infecção in vitro e in vivo, e, no caso dos parasitas superexpressores de cTXNPx, para avaliação da resistência a estresse oxidativo. Recentemente observamos que as cepas PH8 e LV79 de L. (L.) amazonensis mantidas em nosso laboratório apresentam padrões de infecção distintos em camundongos C57BL/6 e BALB/c e em macrófagos in vitro. Enquanto lesões pela cepa LV79 são bem menores nas duas linhagens murinas, lesões significantemente maiores e mais precoces são observadas após inoculação da cepa PH8. De forma semelhante, observamos maior porcentagem de células infectadas e de amastigotas por macrófago em infecções in vitro com a cepa PH8 do que com LV79. Pretendemos investigar esse fenótipo comparando o proteoma dessas cepas para identificar potenciais fatores de virulência de L. (L.) amazonensis. Analisaremos ainda se elas diferem quanto à fagocitose por macrófagos e à indução de citocinas e NO por essa célula. (AU)