Abordagem proteômica metalômica e de expressão de proteínas estruturais, proteolíticas e reguladoras do tecido muscular esquelético no post-mortem e suas relações com o crescimento e a maciez da carne em animais da raça Nelore (Bos indicus).

Resumo

O presente projeto objetiva realizar uma abordagem mais específica acerca da caracterização, expressão e quantificação de importantes proteínas relacionadas ao crescimento do tecido muscular esquelético e a maciez da carne de animais Nelores. Para tanto serão utilizados dados e amostras de 90 animais machos Nelores inteiros com idade aproximada de 27 meses submetidos a manejo de crescimento e acabamento em confinamento por 95 dias. Durante o confinamento foram tomadas medidas de peso e calculados os ganhos de peso vivo nos períodos. Os animais foram abatidos com peso vivo médio de 550 kg, quando então foram coletadas amostras para as análises de expressão gênica e proteica. As carcaças foram então resfriadas por 24 horas quando foram coletadas amostras do músculo Longissimus thoracis para a realização das análises de produção e de qualidade de carne como: área de olho de lombo, espessura de gordura subcutânea, coloração instrumental da carne, força de cisalhamento, perdas por cozimento e determinação do índice de fragmentação miofibrilar e lipídeos totais da carne. As características de desempenho animal, de carcaça e de qualidade da carne serão relacionadas aos estudos analíticos de proteínas. Para tanto serão adotados métodos bioanalíticos específicos como a separação de proteínas por eletroforese bidimensional (2D-PAGE) com ênfase para as proteínas da família das HSP e as do complexo calpaína (calpaína-I, calpaína-II e calpastatina). Serão realizadas ainda a identificação dos íons cálcio nos spots proteicos por fluorescência de raio-X (SR-XRF) e caracterização das proteínas por espectrometria de massas (ESI-MS). Serão feitas as análises de expressão gênica (RT-PCR) das proteínas miofibrilares Cadeia Pesada de Miosina (MyHC) e as relacionadas a proteólise no post-mortem como as calpaína-I, calpaína-II e calpastatina. Ensaios de quantificação de proteínas por Western Blot serão também realizados para as isoformas de MyHC (I, IIa, IIx e IIb) e para as do complexo calpaína. (AU)