Renaturação de antígenos sintetizados como corpos de inclusão em Escherichia coli para preparação de vacinas

Resumo

O direcionamento de respostas imunes para antígenos que se demonstraram capazes de promover respostas imunoprotetoras pode ser uma alternativa promissora para o desenvolvimento de vacinas eficazes e seguras. Geralmente a presença de domínios antigênicos contendo epítopos com a conformação nativa é importante para a geração de anticorpos neutralizantes. Por este motivo, há a necessidade de produção de proteínas recombinantes heterólogas que mantenham as propriedades conformacionais das proteínas alvo preservadas, e, consequentemente do desenvolvimento de processos eficientes de renaturação nos casos em que as proteínas são produzidas como corpos de inclusão (CI). A expressão de proteínas recombinantes em E. coli em geral é bastante elevada, mas frequentemente resulta no acúmulo deste tipo de agregados no citoplasma bacteriano. A dificuldade de padronização de processos de renaturação reprodutíveis e com altos rendimentos a partir destes agregados é um sério problema a ser resolvido para a obtenção de proteínas solúveis e imunologicamente ativas. A aplicação de tecnologia de alta pressão (TPA) promove a solubilização de agregados proteicos, mantendo as estruturas secundária e terciária semelhantes às das proteínas nativas, estruturas estas que em geral estão presentes nos CI. Isto facilita a subsequente renaturação, diferentemente do que ocorre quando se utiliza o processo tradicional de solubilização dos CI na presença de altas concentrações de agentes desnaturantes. O nosso grupo de pesquisa tem experiência na utilização de TPA para a renaturação de proteínas recombinantes a partir de CI. No presente projeto nos propomos utilizar esse conhecimento para obtermos as proteínas recombinantes do vírus da dengue, da Leptospira interrogans e do Schistosoma mansoni com epítopos conformacionais preservados para uso como antígenos para a geração de anticorpos com afinidade pelos epítopos conformacionais presentes nas respectivas proteínas nativas. (AU)