Modelos in vitro para estudos pré-clínicos de melanoma quimioresistente

Resumo

O melanoma, embora represente somente 4% das neoplasias malignas da pele, é considerada a mais grave por, geralmente, levar o paciente a óbito em poucos meses. A via MAPK está intimamente ligada ao descontrole da proliferação celular, especialmente em melanoma, por esta razão, esta via se tornou um alvo para o desenvolvimento de terapias direcionadas a oncogenes, assim, potentes quimioterápicos como Vemurafenibe (inibidor de BRAFV600E) e Trametinibe (inibidor de MEK) foram desenvolvidos nos últimos anos e considerados uma esperança para os portadores de câncer do tipo melanoma. Altíssimas taxas de respostas vêm sendo alcançadas, o que evidencia a revolução gerada com os inibidores específicos no tratamento de melanoma avançado. Entretanto, a maioria dos pacientes está sujeito à resistência a estes medicamentos, com recidivas após 7 meses do inicio do tratamento em decorrência à diversos mecanismos secundários, justificando a constante busca por novos compostos terapêuticos que possam superar ou minimizar esta quimiorresistência e, efetivamente levar à cura. Dados recentes de nosso laboratório indicam que os compostos 4-nerolidilcatecol (4-NC) e o fenolato de sódio DM-1 induzem morte celular em melanoma de forma especifica, não induzindo o mesmo efeito em células normais. O composto 4-NC é um potente inibidor proteassomal, enquanto o composto DM-1 induz apoptose dependente de caspase-3. Na presente proposta visamos avaliar a possibilidade de superação da quimiorresistência do melanoma aos inibidores de BRAF e de MEK, através da utilização de terapias combinatórias com 4-NC ou DM-1 em células de melanoma humano resistentes à estas terapêuticas atualmente estabelecidas. Para isto, serão desenvolvidas novas linhagens de melanoma humano resistentes aos inibidores vemurafenibe e trametinibe, que terão seu perfil de resistência confirmado através de ensaios de viabilidade celular (MTT) e western blotting; a citotoxicidade da terapia combinatória será avaliada através de ensaios com azul de tripan; fragmentação e danos no DNA; a investigação dos possíveis mecanismos de ação da citotoxicidade será avaliada com ensaios de atividade proteassomal, autofagia e senescência com análise da interferência da terapia combinatória em processos de invasão e migração celular com modelos em monocamada e tridimensional. Além disso, serão estabelecidas culturas primárias de tumores quimioresistentes provenientes de pacientes do Hospital do Câncer de Barretos, portadores de melanoma, visando testes in vitro com as terapias de 4-NC e DM-1, e possível proposta terapêutica conforme os resultados obtidos. (AU)