Análise comparativa do efeito da laserterapia prévia associada ou não ao tratamento pós sobre a modulação de citocinas inflamatórias, do estresse oxidativo e a determinação do tipo de fibra muscular após lesão aguda

Resumo

As lesões musculares representam um dos quadros clínicos mais encontrados nos centros de reabilitação. O laser de baixa potência (LBP) é um recurso que tem demonstrado na literatura resultados positivos no que se refere ao reparo muscular após a ocorrência de diferentes tipos de lesão, contudo, pouco se sabe sobre seus efeitos quando aplicado previamente a uma lesão ou quando existe a associação do tratamento prévio e pós a ocorrência de lesão. O objetivo do presente estudo será avaliar de forma comparativa os efeitos do LBP aplicado previamente à lesão muscular e aplicado tanto previamente quanto após a lesão sobre a expressão e síntese de citocinas inflamatórias (IL-6 e TNF-±) e de proteínas envolvidas no reparo muscular (miostatina e calcineurina), a modulação do estresse oxidativo e sobre a expressão das isoformas de Cadeias Pesadas de Miosina (CPM) além de correlacionar estes achados com os aspectos morfológicos e remodelamento de colágeno durante o processo de reparo do músculo esquelético de ratos após lesão aguda induzida por criolesão. Serão utilizados ratos Wistar, divididos em 04 grupos: (1) Controle; (2) Criolesionados sem tratamento; (3) Criolesionados e tratados com LBP previamente a indução da lesão (4) Criolesionados e tratados com LBP previamente e após a indução da lesão. Os períodos de análise serão 1 e 3 dias para análise do estresse oxidativo, 1, 3 e 7 dias para a avaliação das citocinas inflamatórias e 3, 7 e 14 dias para análises de CPMs, calcineurina e miostatina, e dos aspectos morfológicos e remodelamento de colágeno. A criolesão consistirá de duas aplicações de bastão resfriado em nitrogênio líquido diretamente no músculo tibial anterior (TA). Para o tratamento com LBP será utilizado o equipamento da MMoptics AsGaAl (» 780nm) utilizando densidade de energia de 10 J/cm², potência de 40mW e tempo de 10 segundos. A expressão e síntese de IL-6, TNF-±, miostatina e calcineurina serão avaliados por PCR em tempo real quantitativo (PCRq) e ELISA respectivamente e a expressão gênica e protéica de CPMs, que permitem a avaliação funcional da fibra neoformada por PCRq e Western Blotting respectivamente. Os aspectos morfológicos serão avaliados por coloração de H&E e a deposição e organização das fibras colágenas pela coloração de picrosirius sob luz polarizada. O estresse oxidativo será avaliado pela lipoperoxidação (LPO), pelo dano a proteínas, e pela análise das enzimas antioxidantes, catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx). Os dados serão analisados através do software Bioestat 5.0 (PA, Brasil). A distribuição da normalidade dos dados será avaliada pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. Os dados com distribuição paramétrica serão submetidos ao teste One-way ANOVA seguido pelo teste de Tukey para comparação entre os grupos. Os dados com distribuição não paramétrica serão submetidos ao teste One-way ANOVA on Ranks seguido pelo teste de Dunn's para a comparação entre grupos. Os níveis de confiança serão ajustados para 95% (p<0.05). (AU)