Investigação do papel das células-tronco de câncer e do microambiente no processo de transição epitélio-mesenquimal, invasão e metástase do carcinoma epidermóide de boca

Resumo

Evidências recentes mostraram que há uma ligação entre as células-tronco de câncer (CSC) e o processo de transição epitélio-mesenquimal (TEM), de forma que as CSC são mais migratórias e exibem maior potencial metastático comparado com as demais células tumorais. Sabe-se, ainda, que o processo de TEM é aumentado durante a hipóxia e por citocinas inflamatórias, que correspondem a influências ambientais comuns nos tumores. Nesse contexto, o objetivo deste estudo é determinar os fatores que influenciam o comportamento das CSC em TEM, assim como investigar se sua assinatura molecular pode ser utilizada para a identificação de biomarcadores que possam ser utilizados como fatores prognósticos ou para escolha do tratamento. Para este fim, diferentes marcadores relacionados com CSC (CD44, P75NGFR, BMI-1 e ALDH-1), TEM (vimentina, Snail, Axl, E/N-caderina e Twist1), macrófagos (CD68, CD163 e F4/80) e via do TGFB1 serão avaliados por meio de imuno-histoquímica em tecidos de CEC primário e linfonodos metastáticos correpondentes. Os níveis de expressão de CD44 e ESA também serão avaliados por meio de citometria de fluxo em amostras teciduais frescas, sendo todos esses dados posteriormente relacionados com parâmetros clínico-patológicos. As células tumorais circulantes no sangue periférico de pacientes com CEC de boca avançado serão paralelamente isoladas, quantificadas e caracterizadas em relação ao seu fenótipo de CSC e TEM. Por fim, a relação funcional entre macrófagos associados ao tumor (MAT), CSC e fenômeno de TEM será investigada em relação à capacidade invasiva das diferentes subpopulações de CSC (em TEM ou não), isoladas por separação celular por meio de citometria de fluxo, utilizando-se ensaios de co-cultivo indireto e ensaios de invasão.O papel de citocinas liberadas pelos MAT, assim como de TGFB1, será especificamente avaliado por meio de ensaios de silenciamento ou superexpressão gênica. (AU)