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Estudos do papel da fosforilação e da ligação de proteínas parceiras na regulação da função de miosinas V humanas

Resumo

Neste próximo projeto continuaremos nossos estudos, como anteriormente, nas MioVs. A combinação de abordagens estruturais e funcionais será mantida e nosso objetivo consistirá em responder novas perguntas que surgiram ao longo desses dois anos de trabalho.Primeiramente, queremos saber qual o papel da fosforilação do CBD na regulação da função de MioV de mamíferos. Para tanto, pretendemos resolver a estrutura da forma fosfo-mimética do CBD de MioVa, investigar se a fosforilação interfere no mecanismo de auto-inibição desse motor molecular e testar se ela determina a seletividade de proteínas parceiras.Nossa segunda pergunta é sobre o papel do splicing alternativo no reconhecimento e seletividade de parceiros moleculares para MioV. Nesse caso, realizaremos ensaios de duplo híbrido usando como iscas construções que contenham o CBD de MioVa fusionados a diferentes combinações de exons do domínio coiled coil. Paralelamente, realizaremos o mesmo ensaio usando como isca construções de MioVb e MioVc similares as construídas para MioVa, a fim de se obter informações a respeito de redundância e divergência funcional entre essas três proteínas parálogas. Para melhor entender os determinantes estruturais para o reconhecimento de proteínas parceiras por MioVs, pretendemos estudar complexos entre as proteínas Rab (Ras-like small GTPases) 3a, 8a, 10 e 39b e domínios de MioV por cristalografia, SAXS e outras técnicas que se fizerem necessárias. Tais interações foram recentemente identificadas por Lindsay e colaboradores (Lindsay, et al. 2013). Interessantemente, Rab3a e 39b interagem com o CBD de MioVa enquanto que Rab 8a e Rab10 se ligam em regiões específicas do domínio coiled coil que sofrem splicing alternativo (Lindsay, et al. 2013). Esse conjunto de informações terá uma grande contribuição para o entendimento de aspectos estruturais e funcionais das miosinas de classe V. (AU)

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Publicações científicas (5)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SANTOS, CLELTON A.; ZANPHORLIN, LET-CIA M.; CRUCELLO, ALINE; TONOLI, CELISA C. C.; RULLER, ROBERTO; HORTA, MARIA A. C.; MURAKAMI, MARIO T.; DE SOUZA, ANETE PEREIRA. Crystal structure and biochemical characterization of the recombinant ThBgl, a GH1 beta-glucosidase overexpressed in Trichoderma harzianum under biomass degradation conditions. BIOTECHNOLOGY FOR BIOFUELS, v. 9, . (14/09720-9, 14/18856-1, 13/13309-0, 08/52197-4)
DOLCE, LUCIANO G.; OHBAYASHI, NORIHIKO; DA SILVA, DANIEL F. C.; FERRARI, ALLAN J. R.; PIROLLA, RENAN A. S.; SCHWARZER, ANA C. DE A. P.; ZANPHORLIN, LETICIA M.; CABRAL, LUCELIA; FIORAMONTE, MARIANA; RAMOS, CARLOS H. I.; et al. Unveiling the interaction between the molecular motor Myosin Vc and the small GTPase Rab3A. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 212, . (14/09720-9, 16/13195-2, 14/00584-5)
TUROWSKI, VALERIA R.; RUIZ, DIEGO M.; NASCIMENTO, ANDREY F. Z.; MILLAN, CLAUDIA; SAMMITO, MASSIMO D.; JUANHUIX, JUDITH; CREMONESI, ALINE SAMPAIO; USON, ISABEL; GIUSEPPE, PRISCILA O.; MURAKAMI, MARIO T.. Structure of the class XI myosin globular tail reveals evolutionary hallmarks for cargo recognition in plants. ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION D-STRUCTURAL BIOLOGY, v. 77, n. 4, p. 522-533, . (14/09720-9, 13/08904-6)
DOLCE, LUCIANO G.; SILVA-JUNIOR, RUI M. P.; ASSIS, LEANDRO H. P.; NASCIMENTO, ANDREY F. Z.; ARAUJO, JACKELINE S.; MESCHEDE, INGRID P.; ESPREAFICO, ENILZA M.; DE GIUSEPPE, PRISCILA O.; MURAKAMI, MARIO T.. Myosin Va interacts with the exosomal protein spermine synthase. BIOSCIENCE REPORTS, v. 39, n. 3, . (13/08135-2, 11/20229-7, 16/10862-8, 18/04017-9, 09/14257-8, 14/00584-5, 04/08868-0, 14/09720-9, 14/03989-6)
ASSIS, L. H. P.; SILVA-JUNIOR, R. M. P.; DOLCE, L. G.; ALBORGHETTI, M. R.; HONORATO, R. V.; NASCIMENTO, A. F. Z.; MELO-HANCHUK, T. D.; TRINDADE, D. M.; TONOLI, C. C. C.; SANTOS, C. T.; et al. The molecular motor Myosin Va interacts with the cilia-centrosomal protein RPGRIP1L. SCIENTIFIC REPORTS, v. 7, . (09/08312-6, 11/20229-7, 14/18189-5, 04/08868-0, 09/54882-9, 14/09720-9, 09/54014-7)

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