Análise da variação no número de cópias (CNV) de segmentos de DNA em pacientes de uma família com síndrome nem 2ª e mutação p.G533C no gene RET: identificação de regiões associadas à gênese e progressão do carcinoma medular da tiróide

Resumo

O carcinoma medular da tiroide (CMT) é uma neoplasia das células C da tiroide que pode ocorrer na forma esporádica (75-80%) ou hereditária (20-25%). A forma hereditária pode apresentar-se isoladamente na forma de carcinoma medular de tiroide familial (CMTF) ou como um dos componentes das síndromes de neoplasia endócrina múltipla dos tipos 2A ou 2B (NEM 2A ou NEM 2B). A forma hereditária segue o padrão autossômico dominante e, é causado por mutações ativadoras nas células da linhagem germinativa no gene RET. O nosso grupo identificou uma nova mutação no exon 8 (p.G533C) do gene RET em pacientes com NEM 2A. O seguimento desta grande família com a mutação p.G533C revelou uma grande heterogeneidade clínica entre os portadores da mutação, principalmente associadas a agressividade tumoral. Recentemente, após análise do DNA constitucional de pacientes com CMT metastático (n=7) e não metastático (n=8), regiões com variações no número de cópias (CNV) associadas a predisposição aumentada do desenvolvimento de metástase aos linfonodos. No presente trabalho, temos como objetivo inicial investigar se regiões com perda de heterozigosidade (LOH), presentes no DNA constitucional destes pacientes, podem estar correlacionadas a presença de metástases aos linfonodos, um dos fatores indicadores de pior prognóstico, progressão e agressividade tumoral. Para isso, o DNA constitucional de pacientes, isolado de amostras de pacientes com CMT metastático (n=8) e não metastático (n=12), serão analisados. Posteriormente, investigaremos CNVs e LOH associadas à gênese do CMT e da HCC, lesão precursora do CMT hereditário. Para isso, DNA isolado de amostras de pacientes com hiperplasia de células C (HCC) (n=5), pacientes com CMT (n=5) e amostras do DNA constitucional destes pacientes (n=10) serão investigados. As amostras serão analisadas utilizando a plataforma Genome-Wide Human SNP Array 6.0. Os dados serão inicialmente analisados pelo Nexus Copy Number, Tumor Aberration Prediction Suite (TAPS) e PennCNV. Os achados serão validados por PCR quantitativa. Posteriormente, correlacionaremos a relevância das alterações encontradas com dados clinico-patológicos. Acreditamos que esta análise poderá contribuir principalmente para a compreensão da gênese e/ou progressão do carcinoma medular da tiroide da forma hereditária. (AU)