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Estudo do comportamento cinético das convertases

Processo: 14/02205-1
Modalidade de apoio:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de setembro de 2014 - 30 de novembro de 2016
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Wagner Alves de Souza Júdice
Beneficiário:Wagner Alves de Souza Júdice
Instituição Sede: Pró-Reitoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Extensão. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Mogi das Cruzes , SP, Brasil
Pesquisadores associados:Edgar Julian Paredes-Gamero ; Ivarne Luis dos Santos Tersariol ; Katia Cristina Ugolini Mugnol
Assunto(s):Termodinâmica  Enzimas proteolíticas  Proteínas do sistema complemento 
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:cinética rápida | Constantes Cinéticas | Kex2 | Pc1 | Pró-Proteíno Convertases | Termodinâmica | Enzimologia

Resumo

As proteino-convertases (PCs) são enzimas proteolíticas que pertencem à família das serino-proteases semelhantes à subtilisina. Essas enzimas são encontradas em células eucarióticas na rota secretória, em vesículas secretórias do trans-Golgi que estão envolvidas no processamento de pró-proteínas, pró-hormônios, pró-receptores e proteínas do capsídios virais. São endopeptidases dependentes de Ca2+ que reconhecem e clivam sequências básicas Lys-Arg ou Arg-Arg presentes no domínio C-terminal de seus substratos proteicos e essas enzimas estão envolvidas em vários processos fisiopatológicos, tais como: processamento dos fatores de crescimento tecidual TGF-² e BMP-4, do pró-receptor da insulina, da glicoproteína gp160 do vírus do HIV, da glicoproteína do vírus Ebola e do antígeno protetivo antrax. A família das PCs de mamíferos compreende sete membros, a furina, PACE4, PC4, PC5/6, PC7, PC1 e PC2. A convertase Kex2 é tida como o arquétipo das PCs e foi primeiramente identificada em Saccharomyces cerevisiae. Neste projeto objetivamos estudar a especificidade das convertases Kex2, PC1 e Furina sobre a hidrólise de substratos peptídicos fluorescentes do tipo FRET, bem como, determinar as constantes de velocidades individuais de cada passo catalítico das convertases, ou seja, a determinação do passo de ligação do substrato (constante de associação k1 e dissociação k-1) e da catálise do substrato (constante de acilação k2 e hidrólise k3) por técnicas de monitoração da hidrólise de substratos fluorescentes, por "stopped-flow" e pelo efeito da temperatura nas diferentes constantes de velocidade da reação enzimática. Também, será estudado o efeito de moduladores alostéricos sobre a atividade das convertases, tais como: a ligação de metais mono- e divalentes às enzimas e o efeito da interação com glicosaminoglicanos. O efeito da modulação alostérica dos ligantes também será avaliado pela alteração conformacional das enzimas por florescência intrínseca e por espectroscopia de dicroísmo circular. Assim, o conjunto de informações derivados dos estudos de especificidade, análise termodinâmica, atuação de moduladores permitirá o melhor entendimento do comportamento cinético dessas enzimas proteolíticas. (AU)

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Publicações científicas (13)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DE SOUZA, ALINE APARECIDA; DE ANDRADE, DEBORA MARTINS; SIQUEIRA, FABIO DA SILVA; DI IORIO, JULIANA FORTES; VELOSO, MARCIA PARANHO; COELHO, CAMILA DE MORAIS; JUNIOR, CLAUDIO VIEGAS; GONTIJO, VANESSA SILVA; DOS SANTOS, MARCELO HENRIQUE; ZOREL MENEGHETTI, MARIA CECILIA; et al. Semysinthetic biflavonoid Morelloflavone-7,4 `,7 `',3 `'',4 `''-penta-O-butanoyl is a more potent inhibitor of Proprotein Convertases Subtilisin/Kexin PC1/3 than Kex2 and Furin. BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-GENERAL SUBJECTS, v. 1865, n. 12, . (14/02205-1)
PAPP, LUIZ ANTONIO; RODRIGUES, FLAVIO APARECIDO; DE SOUZA JUDICE, WAGNER ALVES; ARAUJO, WELINGTON LUIZ. Onsite Wastewater Treatment Upgrade for Water Reuse in Cooling Towers and Toilets. WATER, v. 14, n. 10, p. 14-pg., . (17/12510-4, 21/01503-2, 14/02205-1, 16/25112-4)
MANFREDI, MARCELLA ARAUJO; ANTUNES, ALYNE ALEXANDRINO; PASSOS JESUS, LARISSA DE OLIVEIRA; JULIANO, MARIA APARECIDA; JULIANO, LUIZ; DE SOUZA JUDICE, WAGNER ALVES. Specificity characterization of the alpha-mating factor hormone by Kex2 protease. Biochimie, v. 131, p. 149-158, . (14/02205-1)
PAPP, LUIZ ANTONIO; CARDINALI-REZENDE, JULIANA; DE SOUZA JUDICE, WAGNER ALVES; SANCHEZ, MARILIA BIXILIA; ARAUJO, WELINGTON LUIZ. Low biological phosphorus removal from effluents treated by slow sand filters. Applied Microbiology and Biotechnology, v. 106, n. 17, p. 13-pg., . (21/01503-2, 17/12510-4, 16/25112-4, 14/02205-1)
LOURENCO, ESTELA MARIANA GUIMARAES; DI IORIO, JULIANA FORTES; DA SILVA, FERNANDA; FIALHO, FELIPE LEONARDO BLEY; MONTEIRO, MELQUISEDEQUE MATEUS; BEATRIZ, ADILSON; PERDOMO, RENATA TRENTIN; BARBOSA, EUZEBIO GUIMARAES; OSES, JEAN PIERRE; DE ARRUDA, CARLA CARDOZO PINTO; et al. Flavonoid Derivatives as New Potent Inhibitors of Cysteine Proteases: An Important Step toward the Design of New Compounds for the Treatment of Leishmaniasis. MICROORGANISMS, v. 11, n. 1, p. 23-pg., . (21/01503-2, 16/25112-4, 14/02205-1)
ANTUNES, ALYNE ALEXANDRINO; PASSOS JESUS, LARISSA DE OLIVEIRA; MANFREDI, MARCELLA ARAUJO; DE SOUZA, ALINE APARECIDA; MARCONDES MACHADO, MAURICIO FERREIRA; MORAES E SILVA, PAMELA; ICIMOTO, MARCELO YUDI; JULIANO, MARIA APARECIDA; JULIANO, LUIZ; DE SOUZA JUDICE, WAGNER ALVES. Thermodynamic analysis of Kex2 activity: The acylation and deacylation steps are potassium- and substrate-dependent. Biophysical Chemistry, v. 235, p. 29-39, . (14/02205-1, 15/11190-0, 16/25112-4)
COSTA, CLAUDIA A.; LOPES, RAYSSA M.; FERRAZ, LETICIA S.; ESTEVES, GABRIELA N. N.; DI IORIO, JULIANA F.; SOUZA, ALINE A.; DE OLIVEIRA, ISADORA M.; MANARIN, FLAVIA; JUDICE, WAGNER A. S.; STEFANI, HELIO A.; et al. Cytotoxicity of 4-substituted quinoline derivatives: Anticancer and antileishmanial potential. Bioorganic & Medicinal Chemistry, v. 28, n. 11, . (16/04289-3, 18/25747-5, 16/25112-4, 17/24821-4, 14/02205-1)
CARVALHO, DIEGO B.; DAS NEVES, AMARITH R.; PORTAPILLA, GISELE B.; SOARES, OZILDEIA; SANTOS, LARISSA B. B.; OLIVEIRA, JEFFERSON R. S.; VIANNA, LUAN S.; JUDICE, WAGNER A. S.; CARDOSO, IARA A.; LUCCAS, PEDRO H.; et al. Repurposing of 5-nitrofuran-3,5-disubstituted isoxazoles: A thriving scaffold to antitrypanosomal agents. ARCHIV DER PHARMAZIE, v. N/A, p. 9-pg., . (14/02205-1, 16/25112-4, 21/01503-2)
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DA CUNHA, GISLAINE A.; DE SOUZA, RONAN F. F.; DE FARIAS, RENAN L.; MOREIRA, MARIETE B.; SILVA, DEBORA E. S.; ZANETTI, RENAN D.; GARCIA, DANIEL M.; SPINDOLA, DANIEL G.; MICHELIN, LUIS F. G.; BINCOLETTO, CLAUDIA; et al. Cyclopalladated compounds containing 2,6-lutidine: Synthesis, spectral and biological studies. Journal of Inorganic Biochemistry, v. 203, . (12/15486-3, 14/02205-1, 09/54011-8, 16/25112-4)
DE MOURA, THALES REGGIANI; ZANETTI, RENAN DIEGO; SILVA, DEBORA EDUARDA SOARES; DE FARIAS, RENAN LIRA; MAURO, ANTONIO EDUARDO; PEREIRA, JOSE CLAYSTON MELO; DE SOUZA, ALINE APARECIDA; DA SILVA SIQUEIRA, FABIO; DE SOUZA JUDICE, WAGNER ALVES; LIMA, MAURO ALMEIDA; et al. Palladium(ii) complexes bearing 1-iminothiolate-3,5-dimethylpyrazoles: synthesis, cytotoxicity, DNA binding and enzymatic inhibition studies. NEW JOURNAL OF CHEMISTRY, v. 44, n. 45, p. 19891-19901, . (15/12098-0, 16/25112-4, 14/02205-1, 09/54011-8, 19/11242-1, 16/17711-5)
JESUS, LARISSA DE OLIVEIRA PASSOS; DE SOUZA, ALINE APARECIDA; TORQUATO, HERON FERNANDES VIEIRA; GONTIJO, VANESSA SILVA; DE FREITAS, ROSSIMIRIAN PEREIRA; GESTEIRA, TARSIS FERREIRA; COULSON-THOMAS, VIVIEN JANE; TORQUATO, RICARDO JOSE SOARES; TANAKA, APARECIDA SADAE; PAREDES-GAMERO, EDGAR JULIAN; et al. In Vitro Study of Cytotoxic Mechanisms of Alkylphospholipids and Alkyltriazoles in Acute Lymphoblastic Leukemia Models. Molecules, v. 27, n. 23, p. 23-pg., . (21/01503-2, 16/25112-4, 14/02205-1)
PAPP, LUIZ ANTONIO; CARDINALI-REZENDE, JULIANA; JUDICE, WAGNER ALVES DE SOUZA; SANCHES, MARILIA BIXILIA; ARAUJO, WELINGTON LUIZ. Total phosphorus contents currently found in the raw wastewater-Problems and technical solutions for its removal in full-scale wastewater treatment plants. RESOURCES CONSERVATION AND RECYCLING, v. 196, p. 10-pg., . (21/01503-2, 16/25112-4, 14/02205-1, 16/24290-6, 14/08061-1, 17/12510-4)

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