Efeitos da endotelina 3 e da leptina na morfologia e função renal in vivo: participação do sistema renina-angiotensina intrarrenal

Resumo

Os rins são órgãos importantes para a biologia do sistema renina-angiotensina (SRA), endotelinas (ETs) e leptina. Os rins sintetizam angiotensina II (Ang II) e as 3 isoformas ativas de ETs (ET-1, ET-2 e ET-3). Além disso, expressam os receptores AT-1 e AT-2 para Ang II, ET-A e ET-B para ETs, Ob-Ra e Ob-Rb para leptina. Objetivos: Os projetos reunidos nessa proposta de Projeto Regular têm em comum o estudo da morfologia e função renal frente às alterações geradas pela hipertensão arterial associada aos efeitos de interação da Ang II com a endotelina 3 (ET-3) ou a leptina. Todos os projetos estão focados no estudo da morfologia, hemodinâmica e função tubular renal; da expressão de RNAm para os genes dos componentes dos sistemas SRA, endotelinas e receptores de leptina; da expressão protéica e identificação de fatores responsáveis por lesões no tecido renal. Descrição: No projeto de número 1 será avaliado o efeito do tratamento crônico com Ang II e/ou Losartan ou ABT 627 (antagonistas dos receptores AT-1 e ET-A, respectivamente); efeito do tratamento crônico com ET-3 e/ou BQ 788 (antagonista do receptor ET-B) sobre a pressão arterial, a hemodinâmica, morfologia e função tubular renal, expressão de RNAm para os genes do sistema endotelinas (pró-endotelina, enzimas conversoras de ETs - ECE1-ECE3) e para os genes do SRA (angiotensinogênio, renina, e enzimas conversoras de Ang II - ECA e ECA2); expressão dos receptores ET-A, ET-B, AT-1 e AT-2 nas diferentes porções do rim, expressão dos transportadores de Na+ [(trocador Na+/H+ isoforma 3 - NHE3; co-transportador Na+/K+/2Cl- - NKCC2) e o canal de Na+ epitelial - ENaC- isoformas ± e ²]. No projeto de número 2 será avaliado o efeito do tratamento crônico com leptina e/ou Losartan sobre a pressão arterial, a hemodinâmica, morfologia e função tubular renal, a expressão de RNAm dos genes: angiotensinogênio, renina, ECA, nefrina (expressa em podócitos e envolvida em processos de albuminúria), a expressão proteica do receptor de leptina Ob-Rb e receptores de Ang II (AT-1 e AT-2). Métodos empregados: A função renal será avaliada por experimentos de clearance renal e análises de parâmetros urinários e plasmáticos. As análises morfológicas serão realizadas por imuno-localização de proteínas através de microscópio acoplado a uma câmera de video e a um analisador de imagens (Axiovision, Carl Zeiss). A localização dos receptores ET-A, ET-B AT-1 e AT-2 nas diferentes porções do rim, serão avaliadas por imunofluorescência. A expressão gênica será avaliada pelo método de RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) e a expressão de proteínas será avaliada por meio de Western Blot. Resultados esperados: Com esses estudos esperamos contribuir para os esclarecimentos sobre os efeitos da interação entre o sistema renina angiotensina e a endotelina 3 ou a hiperleptinemia nos mecanismos envolvidos com a injúria do tecido renal. Os esclarecimentos desses processos nos permitirá, futuramente, a busca de tratamentos farmacológicos adequados para corrigir os danos que a Ang II associada às endotelinas e á hiperleptinemia gera sobre os rins. Todas as alterações morfológicas e funcionais observadas servirão de base para futuros estudos in vivo, usando endotelina-1 e in vitro, com os quais pretendemos explorar as vias de sinalização intracelular envolvidas com os mecanismos associados aos efeitos da interação entre SRA, ETs e hiperleptinemia na injúria glomerular, podócitária e tubular. Os estudos in vitro serão realizados em culturas permanentes de células mesangiais, podócitos, túbulos proximais e de dutos coletores. (AU)