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Análise da diferenciação e atividade de células clésticas cultivadas sobre osso, dentina e esmalte e tratadas com bisfosfonatos

Processo: 13/02240-9
Modalidade de apoio:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de julho de 2014 - 30 de junho de 2016
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia - Clínica Odontológica
Pesquisador responsável:Victor Elias Arana-Chavez
Beneficiário:Victor Elias Arana-Chavez
Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Biologia molecular  Cultura de células  Células clásticas  Difosfonatos  Marcador molecular 
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Biologia molecular | Bisfosfonatos | Células clásticas | cultura de células | Imunomarcação | reabsorção | Biologia Oral

Resumo

As células clásticas têm como função a degradação de tecidos mineralizados, em eventos fisiológicos e patológicos. Para desempenharem sua função, desenvolvem podossomos os quais contêm filamentos de actina arranjados formando um anel para aderir a seu substrato. A adesão ocorre através da ligação de integrinas ±v²3 da membrana à sequência RGD de proteínas não colágenas da matriz. Na membrana da borda em escova são secretadas enzimas como a fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) e íons Cl- e H+. A ATPase vacuolar (V-ATPase) promove a secreção de íons H+, e sua subunidade B2 se liga à actina ao ser direcionada à membrana plasmática das células clásticas ativadas. Os bisfosfonatos são drogas com reconhecida capacidade de inibir a reabsorção de tecidos mineralizados por células clásticas. Os bisfosfonatos não nitrogenados como o etidronato atuam induzindo a formação de análogos tóxicos do ATP. Os bisfosfonatos nitrogenados como o alendronato e ácido zoledrônico impedem a prenilação de GTPases, essenciais ao funcionamento das células clásticas. O objetivo do presente projeto é analisar o efeito dos bisfosfonatos etidronato, alendronato e ácido zoledrônico sobre a expressão de RANK, c-FMS, TRAP, catepsina K e DC-STAMP pelas células clásticas em cultura primária a partir da medula óssea de camundongos por PCR Real Time e a expressão de RANKL e OPG pelas demais células indiferenciadas da medula óssea. Avaliaremos também o direcionamento da subunidade B2 da V-ATPase para a membrana plasmática nas células cultivadas, das quais separaremos as proteínas do citoplasma e da membrana plasmática por ultracentrifugação e faremos análise pelo método Western Blotting. Essas análises serão correlacionadas com o estudo morfológico do processo de adesão e atividade de células clásticas obtidas da medula óssea de camundongos cultivadas sobre diferentes substratos (osso compacto, dentina e esmalte bovinos) em microscopia de luz, eletrônica de transmissão e imunofluorescência. As áreas reabsorvidas serão analizadas por microscopia eletrônica de varredura. Assim, com a aplicação das metodologias propostas, pretendemos compreender o funcionamento de células clásticas frente a diferentes substratos. Ainda, pretendemos através do emprego de bisfosfonatos obter melhor compreensão sobre o mecanismo de reabsorção das células clásticas, bem como o processo de inibição de sua atividade pelos diferentes bisfosfonatos. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
REZENDE, ELOIZA; BRADASCHIA-CORREA, VIVIAN; SIVIERO, FABIO; AMBROSIO, LUCAS M. B.; ARANA-CHAVEZ, VICTOR E.. Effects of bisphosphonates on osteogenesis and osteoclastogenesis signaling during the endochondral ossification of growing rats. Cell and Tissue Research, v. 368, n. 2, p. 287-300, . (10/07509-8, 13/02240-9)
BRADASCHIA-CORREA, VIVIAN; RIBEIRO-SANTOS, GIOVANNA C.; DE FARIA, LORRAINE PERCILIANO; REZENDE-TEIXEIRA, PAULA; ARANA-CHAVEZ, VICTOR E.. Inhibition of osteoclastogenesis after bisphosphonate therapy discontinuation: an in vitro approach. Journal of Molecular Histology, v. N/A, p. 9-pg., . (13/02240-9)

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