Influência do fluconazol na resposta imune a infecção por Candida albicans em modelo in vitro de epitélio oral

Resumo

Nos últimos anos, fatores como o aumento da incidência de doenças invasivas por fungos, além do surgimento de isolados resistentes aos medicamentos, têm acelerado o interesse de tais medicamentos não só sobre os patógenos, mas também a sobre a resposta imunológica do hospedeiro. Tendo em vista o escasso conhecimento sobre a influência do efeito de concentrações salivares de antifúngicos sistêmicos utilizados no tratamento de candidose oral sobre a interação entre patógeno e hospedeiro, o objetivo deste estudo será avaliar in vitro a resposta imune do epitélio oral humano infectado com biofilme de Candida albicans e, separadamente, interação C. albicans x macrófagos, ambos na presença de fluconazol em concentração salivar e plasmática, respectivamente. Serão utilizados dois isolados clínicos de C. albicans (P01, P34) e uma cepa de referência como controle (ATCC 90028). Sobre o epitélio serão inoculadas C. albicans (2x106 céls./mL) e adicionado meio RPMI 1640 e 2,56 ¼g/mL de fluconazol, concentração biodisponível na saliva, as avaliações serão realizadas 24 horas após. A avaliação da expressão gênica de interleucinas e enzimas fúngicas proteolíticas (SAPs) será realizada por quantitative PCR (qPCR) com a utilização de pares de primers específicos. A quantificação do dano epitelial será avaliada pela detecção de lactato desidrogenase (LDH). A interação entre a C. albicans e macrófagos será realizada em placas de cultura celular, a fagocitose e morte celular da C. albicans será feita por plaquamento e contagem de UFCs, sendo também quantificada a liberação de óxido nítrico e interleucinas pelos macrófagos. Análises complementares da estrutura tecidual e do biofilme serão realizadas por microscopia confocal a laser, no sentido de se verificar a invasão fúngica e biovolume, estrutura e rugosidade do biofilme. Ao final os dados serão analisados conforme sua distribuição e os testes estatísticos adequados serão aplicados. (AU)