Auxílio à pesquisa 13/11111-8 - Neoplasias mamárias, Linhagem celular tumoral - BV FAPESP
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Ativação da via PI3K na expressão de genes regulados pela triiodotironina e estradiol em linhagens celulares de adenocarcinoma mamário

Processo: 13/11111-8
Modalidade de apoio:Auxílio à Pesquisa - Regular
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Sandro José Conde
Beneficiário:Sandro José Conde
Instituição Sede: Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de São Paulo (IFSP). Campus São Roque. São Roque , SP, Brasil
Pesquisadores associados:Celia Regina Nogueira
Assunto(s):Neoplasias mamárias  Linhagem celular tumoral  Receptores de estrogênio  Hormônios tireóideos  Fosfatidilinositol 3-quinases  Tri-iodotironina 
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Fosfatidilinositol-3-cinase | linhagens celulares | Neoplasia de mama | Receptor de estrógeno | triiodotironina | Vias bioquímicas

Resumo

Sabe-se que o estrógeno (E2) e o status hormonal da paciente são importantes para a proliferação e o tratamento do câncer de mama (CaM). Quanto ao hormônio tireoidiano (T3), apesar dos estudos epidemiológicos serem ainda contraditórios em relação a sua influência no câncer de mama, estudos laboratoriais demonstram sua capacidade de aumentar a proliferação de células de CaM com receptor de E2 (ER) positivo, induzindo a expressão de genes normalmente estimulados por E2 (PR, TGFA). Embora o T3 exerça muitas ações pela regulação genômica clássica da transcrição gênica, um número de efeitos do T3 ocorre rapidamente e não são afetados por inibidores da síntese protéica. Ações não genômicas dos hormônios tireoidianos são descritas na membrana plasmática, no citoplasma e em organelas celulares. In vitro, independente da síntese protéica, a tiroxina (T4) induz inositol trifosfato (IP3) e sinalização pelo cálcio aumentando os efeitos de interferon-g via PKC e PKA. Recentemente o nosso grupo demonstrou que os genes Amphiregulin, FBLN1, CLDN6, TGFA foram estimulados por E2 e T3 nas células MCF-7; enquanto o gene HIF1A teve expressão aumentada pelo T3 por meio de via não-genômica direta. Dessa forma, nossa hipótese é que o hormônio tireoidiano altera a expressão dos genes AREG, TGFA e HIF1A sem a necessidade de translocação ao núcleo, ou seja, através da via de ativação de phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K). Para tanto, pretende-se elucidar melhor a via de ação dos hormônios tireoidianos na ativação gênica desses alvos em linhagens celulares de adenocarcinoma de mama. Metodologia: Linhagens celulares de câncer de mama MCF-7 e MDA serão plaqueadas em intervalos de tempo de 10 minutos, 30 minutos, 1 hora e 4 horas com E2 (10-7M), T3 (10-8M), E2 (10-7M) + ICI (1µM), T3 (10-8M) + ICI (1µM), ICI (1µM). Todos os tratamentos empregados serão realizados em triplicata. Em um segundo grupo, as células MCF-7 e MDA-MB-231 passarão pelos mesmos tratamentos na presença de Actinomicina D (5.0 pg/ml), inibidor da síntese de mRNA, para verificar se a expressão de AREG, FBLN1, CLDN6, TGFA e HIF1A são dependentes da expressão gênica prévia. No terceiro grupo essas mesmas células serão submetidas ao tratamento com cicloexamida (50mM), inibidor da expressão protéica, para verificar se a expressão desses genes são dependentes de outra proteína expressa previamente. Os tratamentos em que ocorrer alteração da expressão gênica, em relação ao controle, serão repetidos com associação do LY294002 (50µM), que bloqueia a via PI3K e nos mostra se a ação é dependente dessa via. Será realizada extração de RNA total para a obtenção do cDNA - Transcrição reversa (RT) do RNA e PCR tempo real para expressão dos genes em cada tratamento. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
GLAUCIA R. NOGUEIRA; PAULA S. AZEVEDO; BERTHA F. POLEGATO; LEONARDO A.M. ZORNOFF; SERGIO A.R. PAIVA; CELIA R. NOGUEIRA; NATALIA C. ARAUJO; BRUNO H.M. CARMONA; SANDRO J. CONDE; MARCOS F. MINICUCCI. Roles of the Taql and Bsml vitamin D receptor gene polymorphisms in hospital mortality of burn patients. Clinics, v. 71, n. 8, p. 470-473, . (14/24885-4, 13/11111-8)

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