Adequação e efeito de um sistema de liberação sustentada de fármaco na presença de biofilme patogênico

Resumo

O biofilme é o fator etiológico da maioria das doenças orais como cárie, gengivite e periodontite. Assim, o controle do biofilme pode contribuir para a diminuição destas doenças e muitos estudos tem sido realizados na tentativa de desenvolver produtos contendo antimicrobianos que possam interferir neste mecanismo. Neste sentido, sistemas de liberação sustentada de fármacos tem sido idealizados para utilização na cavidade oral. Entretanto, poucos são os estudos que propõe modelos que simulem as condições encontradas na boca, como presença de bactérias organizadas em um biofilme. Desta forma, nossa proposta é avaliar um modelo de estudo in vitro que contemple os principais desafios para a adequação de um sistema de liberação sustentada a ser aplicada na cavidade oral. A primeira parte do estudo será destinada a obter um sistema semi-sólido liberador de fármaco que seja viável para as condições orais considerando presença de bactérias, seus produtos extracelulares e a dinâmica de permanecer em um meio líquido de reposição diária. Para isto, um sistema de geleificação in situ a base de monoleato de glicerila será desenvolvido e estudos prévios serão realizados de forma a adequá-lo para sua utilização nos modelos de biofilme. O sistema de geleificação desenvolvido será estudado na segunda parte do projeto, onde biofilmes de Streptococcus mutans ou Porphyromonas gingivalis serão formados em lâminas de vidro colocadas em tubos contendo meio de cultura e um dos seguintes tratamentos: 1) Sistema sem fármaco, como controle negativo; 2) Sistema contendo clorexidina 0,12%, como controle positivo; 3) Sistema contendo metronidazol; 4) Sistema contendo extrato hidroetanólico de Baccharis dracunculifolia, um produto natural com efeitos promissores em células planctônicas. A acidogenicidade dos biofilmes será mensurada diariamente assim como a quantidade de princípio ativo liberado no meio de cultura. Após o período experimental para crescimento de cada biofilme, os mesmos serão coletados e homogeneizados por sonicação. A viabilidade bacteriana será monitorada por contagem de bactérias em ágar sangue, os polissacarídeos extracelulares serão extraídos e quantificados e a quantidade de princípio ativo nos biofilmes será analisada por HPLC. A formulação será avaliada em relação à sua massa, tipo de organização cristalina e o princípio ativo residual. Para comparação entre os grupos, inicialmente será analisada a homogeneidade e variabilidade dos resultados. Sendo normal a distribuição dos valores, será usada ANOVA seguido de teste post-hoc para comparação entre grupos. Caso a distribuição não seja normal, será feita a comparação usando o teste de Kruskal-Wallis. O nível de significância aceito será de 5%. (AU)