Avaliação do efeito da Vitamina B12 sobre as fases mitótica e meiótica da espermatogênese e sobre o DNA espermático de ratos tratados com cimetidina

Resumo

A cimetidina tem sido amplamente utilizada para o tratamento de câncer, principalmente do trato gastrintestinal. Esta propriedade da cimetidina baseia-se na ação antagonista de receptores H2 para histamina, a qual atua como um fator de crescimento em diferentes tipos de células tumorais via receptores H2. Além desta via de ação, a inibição do crescimento de tumores pela cimetidina parece também estar relacionada a um efeito antiangiogênico. No sistema reprodutor masculino, a cimetidina tem demonstrado vários efeitos prejudiciais, principalmente sobre os testículos e ductos deferentes. Nos testículos, este fármaco causa alterações nos túbulos seminíferos, incluindo redução da área epitelial, devido à descamação de células germinativas, morte das células de Sertoli e das células mióides peritubulares. Além dos túbulos, danos nas células de Leydig e na microvascularização testicular também têm sido demonstrados. Estudos recentes têm demonstrado que as alterações no epitelio seminífero, causadas pela cimetidina, são amenizadas significantemente pela suplementação dos animais com vitamina B12. Embora ainda não tenha sido esclarecido, é possível que esta vitamina estimule a atividade mitótica e/ou meiótica das espermatogônias e/ou espermatócitos. Sendo assim, considerando as alterações causadas pela cimetidina no processo espermatogênico e o efeito benéfico da vitamina B12 sobre o epitelio seminífero, será proposto: 1) verificar quais células das fases iniciais da espermatogênese (espermatogônias e/ou espermatócitos) são estimuladas pela vitamina B12, tanto nos animais tratados apenas com a vitamina, quanto nos animais tratados com vitamina e cimetidina; 2) avaliar se o tratamento com cimetidina causa alterações no espermograma, bem como alterações na integridade do DNA espermático; 3) verificar se a suplementação com vitamina B12 é capaz de inibir ou amenizar tais alterações espermáticas. Neste estudo, ratos adultos serão tratados com: 100mg de cimetidina/Kg de peso corpóreo (GCMT), 3µg de vitamina B12 (GB12), cimetidina+vitamina B12 (GCMT/B12) e salina (GC). Após tratamento por 50 dias, a cauda do epidídimo esquerdo será coletada e utilizada para o espermograma (morfologia, concentração e motilidade dos espermatozoides). A partir da cauda do epidídimo direito, os espermatozoides serão coletados para análise da integridade do DNA espermático (Ensaio Cometa) e da atividade mitocondrial. Os testículos serão fixados em formaldeído 4% (pH 7,4; 0,1M), e processados para inclusão em parafina (testículos direitos) e em glicolmetacrilato (testículos esquerdos). Os cortes de historesina corados pela HE serão utilizados para a obtenção do número de espermatogônias/túbulo seminífero. A fim de verificar o efeito deletério da cimetidina sobre as espermatogônias, bem como o efeito mitogênico da vitamina B12 sobre estas células, reações de imunofluorescência para a detecção de GFR±1 ou E-caderina (marcadores de espermatogônias A), PCNA ou Ki67 (marcadores para proliferação celular) e caspase-3 (apoptose) serão realizadas. Duplas marcações para confirmar estes efeitos nestas células também serão desenvolvidas. (AU)