Análise da regulação da expressão e caracterização funcional de HTRA1 em células imortalizadas por HPV de alto risco

Resumo

O Papilomavírus Humano é o vírus com maior prevalência entre as infecções transmitidas por via sexual e está associado com várias doenças malignas. O HPV possui genoma de DNA fita dupla e é classificado como de baixo, intermediário ou alto risco oncogênico. As proteínas virais E6 e E7 são as principais responsáveis pela alteração da homeostasia celular e, consequente imortalização. Dois dos mecanismos usados na transformação celular pela proteína E6 consistem no controle transcriconal de genes e na interação com domínios PDZs de proteínas celulares, levando-as a degradação. Uma proteína associada a várias condições patológicas e com domínio PDZ é a protease HtrA1. Essa proteína apresenta baixa expressão em alguns cânceres, sugerindo uma função supressora de tumor. HTRA1 foi selecionado para estudo funcional pois o grupo da Dra. Luísa Lina Villa realizou um microarray onde foi observado baixa expressão deste gene na linhagem HF698. Além disso, foi observado em nosso laboratório, por PCR quantitativo, baixa expressão de HTRA1 em linhagem celular imortalizada por HPV 16 e em amostras de carcinoma de pênis infectadas por HPV de alto risco. O objetivo do presente estudo é avaliar o efeito do gene HTRA1 superexpresso em linhagem celular imortalizada por HPV 16 (HF698), cedida pela Dra. Luísa Lina Villa, através da análise da expressão protéica de HTRA1 e expressão dos oncogenes E6 e E7 de HPV16 após transfecção do vetor contendo a ORF de HTRA1, ensaios de viabilidade, proliferação celular e apoptose. Além disso, verificaremos se o silenciamento de E6 com siRNA aumenta a expressão de HTRA1. As análises que serão realizadas são importantes para o entendimento do efeito de HTRA1 superexpresso na linhagem de queratinócito imortalizada por HPV 16, procurando, com isso, identificar as alterações celulares relacionadas a expressão deste gene. (AU)