Estudo molecular e funcional de transportadores de ions em membranas

Resumo

Os projetos reunidos nessa proposta de projeto temático têm em comum o estudo de transportadores iônicos de membrana. Todos os projetos, à exceção de dois, nos quais são analisados neurônios/células da glia e osteoclastos, estão focados no estudo de células epiteliais renais. Em neurônios serão analisados canais para Na+ sensíveis à voltagem e suas interações com fenilpropenos, e em células gliais, receptores purinérgicos metabotrópicos. Em osteclastos, a modulação da bomba de prótons (H+-ATPase) por calcitonina e inibidores da reabsorção óssea é o foco de estudo. Os demais projetos também estão dirigidos principalmente ao estudo de transportadores de H+, sejam os permutadores Na+/H+ (NHE1, NHE3, NHE8) seja a H+-ATPase tipo vacuolar, tanto em células dos diferentes segmentos de túbulos proximais, como em nefro distal, túbulo contorneado distal, segmento de conexão e ductos coletores. A interação entre a H+-ATPase e canais para C1- tipo CFTR e CLC5 será avaliada utilizando siRNA para silenciar a expressão desses canais em células de túbulos proximais. A interação entre o permutador Na+/H+ e o cotransportador Na+ -Glicose será estudada em túbulos proximais de ratos normais e ratos diabéticos. Serão avaliados os efeitos crônicos da angiotensina II sobre a atividade, expressão e localização de NHEs e H+-A TPase, incluindo quantificação de proteínas, mRNA, análise de promotor, e esclarecimento das vias de sinalização envolvidas nesses processos em diferentes tipos celulares. Além de angiotensina II, serão objeto de análise os efeitos da aldosterona, glicocorticoides e peptídeo atrial natriurético. Será feita uma análise detalhada do promotor do gene NHE3 e de sua modulação por angiotensina e por variações no equilíbrio ácido-base. O papel das urogualinilinas, angiotensina II e prostaglandina E2 sobre a secreção de H+ e K+ em túbulos renais serão avaliados utilizando técnica de micropunção tubular. A internalização de receptores para angiotensina (AT1R) e sua relação com a modulação de NHE1 será avaliada em células de ductos coletores. Proteínas de fusão GST/porção citoplasmática de ATIR serão utilizadas para identificar proteínas que interagem com AT1R em células de túbulos proximais renais. Será ainda introduzida, por um novo membro do grupo, uma linha de pesquisa relacionada a transportadores de NH3/NH4+ em ductos coletores renais, as proteínas RhCG e RhBG. Esses estudos serão realizados em óocitos injetados com mRNAs específicos e serão feitas análises de pH e transporte de H+ no citoplasma e na superfície dos oócitos com o objetivo de determinar a espécie que permeia a membrana. Finalmente, em projeto em colaboração com o grupo de fisiologia cardiovascular, serão avaliadas as modificações renais (expressão de diferentes transportadores e reatividade vascular) em situações de infarto miocárdico agudo e crônico em ratos. (AU)