Investigação do papel dos microRNAs na regulação da expressão do gene C1orf24 em tumores da tiróide humana

Resumo

Estudos anteriores do nosso grupo, utilizando SAGE (do inglês, Serial Analysis of Gene Expression) mostraram que a expressão de C1orf24 (Chromosome1 Open Reading Frame 24) encontra-se aumentada nos carcinomas foliculares da tiroide. A validação por imunoistoquimica, nos diferentes subtipos tumorais, demonstrou que C1orf24 é um dos marcadores capazes de distinguir lesões benignas das malignas com alta sensibilidade (97%) e especificidade (90), o que sugere sua aplicação no diagnóstico pré-operatório dos nódulos da tiroide. Apesar da relevância como marcadores de diagnóstico, pouco se sabe sobre os mecanismos moleculares envolvidos na regulação da expressão de C1orf24.Tem sido amplamente demonstrado que fatores de transcrição e microRNAs (miRs) são potentes reguladores da expressão gênica. Sua expressão varia de acordo com o tecido, estágio de desenvolvimento e tipo tumoral. Propomos identificar, com base em diferentes bancos de dados, miRs que podem ter como alvo C1orf24. Posteriormente, validaremos a expressão destes miRs nas diferentes lesões da tiroide e correlacionaremos com a expressão de C1orf24. Esperamos identificar pelo menos um miR com perda de expressão nos carcinomas da tiroide que apresentam aumento da expressão de C1orf24. Posteriormente, verificaremos os níveis de expressão do miR selecionado e de C1orf24 nas linhagens celulares de carcinoma folicular da tiroide (WRO e FTC 133) bem como nas linhagens celulares de metástase de carcinoma folicular aos linfonodos (FTC 236) ou de pulmão (FTC 238). Uma vez identificado o modelo de estudo in vitro, faremos a expressão ectópica do miR selecionado e verificaremos o efeito na regularão da expressão de C1orf24. Ainda, para confirmarmos o efeito do miR na regulação direta de C1orf24, verificaremos, se a mutação sítio dirigida na região alvo 3'-UTR do mRNA de C1orf24, modulará a expressão de C1orf24 após a re-expressão ectópica do miR. Por fim, verificaremos o efeito da re-expressão do miR no crescimento e morte das células e na modulação da expressão de genes potencialmente regulados por C1orf24. (AU)