Ação do forskolin, da butirolactona I e da roscovitina na maturação de oócitos bovinos e suas implicações na resistência à criopreservação

Resumo

A produção de embriões in vitro (PIV) pela maturação, fecundação e cultivo tornou-se uma valiosa tecnologia de reprodução assistida em sistemas de criação bovina. Entretanto, mesmo com as notáveis inovações neste sistema, o maior entrave para o pleno sucesso desta biotecnologia ainda é o menor índice de prenhez pós-transferência. Sendo assim, muitos laboratórios tentam melhorar o potencial de desenvolvimento e a qualidade do oócito durante a maturação in vitro (MIV). Uma das técnicas mais utilizadas com este objetivo consiste na inibição da maturação meiótica (nuclear) promovendo, ao mesmo tempo, o desenvolvimento do ooplasma. Desta forma este projeto tem como objetivo geral avaliar a ação de inibidores seletivos da quinase dependente de ciclina (butirolactona I e roscovitina) bem como de um ativador da adenilato ciclase (o forskolin) sobre a maturação in vitro de oócitos bovinos e sobre seu desenvolvimento embrionário. Para tanto no experimento 1 será avaliada a maturação nuclear após a exposição dos oócitos a butirolactona I, roscovitina e Forskolon por um período de 12 e 24 horas; será determinada a distribuição das proteínas p34cdc2, ciclina B1, MPF e MAPK nos mesmos oócitos; será avaliado o efeito do tratamento dos oócitos com butirolactona I, roscovitina e forskolin na produção e no ídice de apoptose de embriões e avaliada a ação dos farmacos em embriões produzidos in vitro, com particular enfoque em sua resistência ao processo de vitrificação. No experimento 2 será testado os efeitos da adição de forskolin sobre o cultivo embrionário avaliando se o tratamento do oócito com o forskolin influi na quantidade e distribuição de lipídeos e mitocôndrias nos embriões produzidos, bem como o índice de apoptose de embriões PIV submetidos ao tratamento com forskolin no dia 4,5 ou no dia 6 de cultivo. Alem disso será analisado a resistência dos embriões tratados com forskolin a vitrificação pela a análise do número de celulas (total e viáveis), bem como do índice de apoptose. (AU)