Síntese e caracterização de diferentes glicoformas de tireotrofina humana recombinante (rhTSH) farmacologicamente ativas

Resumo

A tireotrofina humana recombinante (rhTSH) é um hormônio glicoprotéico de grande interesse médico, amplamente utilizado no diagnóstico e terapia de câncer de tireóide, permitindo uma melhora considerável na qualidade de vida de pacientes com esta patologia e que, de outra forma, deveriam ser deixados em condição hipotireoidea com péssima qualidade de vida. Ressaltamos que há somente uma empresa no mundo que comercializa o rhTSH, cujo preço é exorbitante e que o nosso Grupo de Pesquisa já realizou a síntese de rhTSH em células CHO e, posteriormente, a síntese de uma forma humanizada deste hormônio, sempre com relativo depósito de patente. No processo de produção de glicoproteínas terapêuticas em células CHO, o conhecimento de aspectos do processo do cultivo celular que influenciam a glicosilação é extremamente importante para a obtenção de produtos com bioatividade e propriedades farmacológicas definidas. Isto especialmente considerando que a atividade biológica e, consequentemente a ação fisiológica e farmacológica das glicoproteínas, são altamente dependentes da sua porção glicídica, ou seja, da quantidade e estrutura dos oligossacarídeos (glicanos) que a constituem. No presente projeto nos propomos, portanto, a sintetizar e estudar preparações de hTSH com diferentes glicoformas, determinando a porcentagem de ocupação dos sítios de glicosilação (ou seja, quantos, em média, dos três sítios de N-glicosilação da molécula de hTSH estão ocupados), a qualidade e quantidade de estruturas específicas de N-glicanos e seu nível de sialilação. Estas preparações serão obtidas adicionando alguns compostos (íons e moléculas orgânicas) utilizados no cultivo das células CHO produtoras de hTSH, que causam alterações no perfil de glicosilação. Assim sendo, serão estudados os efeitos, neste perfil, do Mn+2, do butirato de sódio e da cicloheximida, individualmente e em combinação, em comparação com o hormônio natural, hipofisário e com o produto recombinante tradicional (ThyrogenR). Vale ressaltar que mesmo as estruturas glicídicas do hTSH natural e do recombinante tradicional ainda são pouco conhecidas e estudadas. Este tipo de estudo é extremamente relevante, tanto do ponto de vista do desenvolvimento de novos biofármacos quanto do ponto de vista do controle de qualidade das glicoproteínas hormonais já utilizadas na clínica médica. (AU)