Mecanismos moleculares de ação dos glicocorticóides endógenos sobre o tráfego de neutrófilos: caracterização da ação sobre os eixos SDF-1alfa/CXCR-4 e IL-17/IL-23/G-CSF

Resumo

Nosso grupo de pesquisa tem investigado os mecanismos de ação dos glicocorticóides endógenos (GCe) sobre a mobilização neutrofílica em condições fisiológicas e de inflamação induzida por diferentes estímulos. Neste contexto, temos mostrado que os GCe controlam as interações dos neutrófilos circulantes com o endotélio microvascular e que as ações moleculares dos GCe sobre as funções adesivas destas células são distintas. Mais recentemente, mostramos que os GCe modulam a mobilização dos neutrófilos da medula óssea para o sangue periférico em condições fisiológicas e que a anexina A1 (ANXA1), uma proteína secretada por diferentes tipos celulares pela ação dos glicocorticóides, está envolvida neste processo, modulando a atividade fagocítica de macrófagos medulares e o eixo SDF-1a/CXCR-4.O presente estudo visa dar continuidade às investigações sobre o papel dos GCe e da ANXA-1 sobre o tráfego de neutrófilos entre a medula óssea e o sangue. Assim, propomos estudar o tráfego de neutrófilos sob diferentes concentrações de GCe (tratamentos farmacológicos com RU 38486 ou ACTH) ou na vigência de resposta inflamatória (LPS, i.p.), focando os eixos SDF-1alfa/CXCR-4, IL-17/IL-23/G-CSF e as expressões de moléculas de adesão em neutrófilos CD49d, CD18 e CD62L. Serão empregados camundongos Balb/c tratados com RU 38486 (antagonista de receptor de glicocorticóides) ou com veículo e animais nocautes para ANXA1 (ANXA1-/-) e respectivos selvagens. Adicionalmente, estes animais serão tratados com ACTH (250µg/kg; i.p.) ou com LPS (50 µg/kg; i.p.) para induzir a secreção de GCe. Os granulócitos da medula óssea e os neutrófilos circulantes serão quantificados por microscopia óptica e as análises morfológicas serão complementadas por ensaios de citometria de fluxo pela marcação de Ly6G. As expressões das moléculas de adesão CD49d, CD62L e CD18 e do receptor de SDF-1 ±, o CXCR-4, em granulócitos da medula e em neutrófilos circulantes serão quantificadas por citometria de fluxo; as concentrações de SDF-1±, IL-17, IL-23, G-CSF em perfusatos da medula óssea e no plasma, além de corticosterona plasmática, serão quantificados por ensaios imunoenzimáticos (ELISA) .É importante salientar que este projeto dará continuidade às colaborações iniciadas com o Dr. Mauro Perretti, do William Harvey Institute of London, e com a Dra Sara Rankin, do Imperial College of London. (AU)