Papel de estatinas na modulação de biomarcadores de inflamação e de adesão celular in vivo e in vitro

Resumo

O processo inflamatório tem um papel fundamental na gênese e desenvolvimento da aterosclerose, sendo que a disfunção endotelial é considerada um dos estágios iniciais da aterogênese. Por meio da inibição da enzima hidroxi-metil-glutaril coA redutase (HMGCR), as estatinas reduzem a biossíntese do colesterol e a formação de isoprenóides, produtos intermediários da síntese do colesterol que são importantes na modificação pós-transcricional de GTPases pequenas que estão envolvidas na disfunção endotelial e inflamação vascular. Esse fenômeno é também conhecido como efeitos pleiotrópicos das estatinas. Com a finalidade de esclarecer os mecanismos moleculares dos efeitos das estatinas sobre a modulação de biomarcadores inflamatórios e de adesão celular serão estudadas a expressão proteica e de RNAm, assim como estabilidade de RNAm de marcadores pro-inflamatórios e moléculas de adesão em resposta à sinvastatina e a ezetimiba. Os efeitos da sinvastatina e a ezetimiba (um hipolimiante não-estatina) sobre a expressão de RNAm de biomarcadores inflamação (eNOS, TNF±, IL-6, NFkB, IL-1B, IL-8, MMP-9 e MCP-1) e de adesão celular (E-selectina, P-selectina, VCAM-1, ICAM-1, PSGL1, L-selectina, VLA-4, LFA-1 e Mac-1) serão avaliados por PCR em tempo real, usando modelos in vitro de células de linhagem endotelial HUVEC e linhagem de monócitos THP-1, assim como também em células mononucleares de sangue periférico (CMSP) provenientes de indivíduos hipercolesterolêmicos (HC) sob terapia hipocolesterolemiante como modelo de estudo in vivo. A expressão das proteínas será avaliada por Western blotting e citometria de fluxo. O efeito desses fármacos sobre a estabilidade de RNAm será avaliada por PCR em tempo real. O efeito dos hipolipemiantes na atividade de NFkB, fator de transcrição que modula a expressão de proteínas inflamatórias, será avaliado por ensaio de mobilidade eletroforética retardada em gel de poliacrilamida (EMSA) que permite estudar as interações DNA-proteinas. Para estudar a participação da eNOS na modulação dos efeitos da sinvastatina sobre os biomarcadores inflamatórios e de adesão, será utilizado o procedimento de silenciamento gênico por interferência de RNA (RNAi) para gerar células HUVEC deficientes de eNOS. Também será investigado o perfil de expressão de micro-RNAs miR-221 e miR-222, em células HUVEC, por PCR em tempo real. Os resultados deste estudo contribuirão para esclarecer os mecanismos moleculares pelos quais as estinas podem regular a resposta inflamatória e melhorar a disfunção endotelial. (AU)