Estudo das interações proteína-proteína entre NS1 de vírus sincicial respiratório humano e proteínas celulares e virais: implicações para resposta imunológica e infectividade

Resumo

O vírus sincicial respiratório humano (hRSV - human respiratory syncytial virus) é o principal agente causador de doenças respiratórias agudas severas (ARI), como pneumonia e bronquiolite. Trata-se de um vírus da família Paramyxoviridae, com simetria helicoidal e envelope lipídico. Possui um genoma de RNA fita simples, não segmentado, com 10 genes codificantes. Um dos fatores que contribuem para o sucesso na replicação viral é devido à evasão do sistema imunológico pelo vírus, processo proporcionado pela proteína NS1. Tal proteína pode agir inibindo ou neutralizando várias etapas da via dos interferons, bem como atuar de forma a auxiliar no silenciamento do complexo ribonucleoprotéico (RNP) do RSV. Para entender o processo de replicação viral, faz-se necessário o estudo do mecanismo de interação das proteínas virais com NS1 e da NS1 com as proteínas celulares. Diante do exposto, os objetivos deste projeto incluem a clonagem e expressão da proteína NS1 do vírus sincicial respiratório, bem como a clonagem das proteínas M, M2-1, M2-2, N, P, NS2, L e as regiões citoplasmáticas das proteínas G e F. Posteriormente, utilizando a técnica de Duplo Híbrido em Saccharomyces cerevisae EGY48, será estudada as possíveis interações proteína-proteína entre a proteína NS1 e as proteínas M, M2-1, N, P, NS2, L e domínio citoplasmático das proteínas G e F do hRSV e entre a NS1 e as proteínas celulares do hospedeiro, após esta verificação as proteínas que apresentarem interações serão expressa e purificadas em larga escala, para futuros ensaios físico-químicos. Os resultados obtidos auxiliarão a elucidar o mecanismo de infectividade viral e, futuramente, propor um inibidor para a replicação viral. (AU)