Análise funcional de genes presentes na bactéria Xanthomonas axonopodis pv. citri para degradação de parede celular

Resumo

A bactéria Xanthomonas axonopodis pv. citri, causadora do cancro cítrico, é responsável por consideráveis prejuízos para a produção de laranja, no Brasil e no mundo. A doença é altamente agressiva para a planta de citros, provocando, entre outros, lesões em folhas e frutos, com redução tanto na qualidade de frutos quanto na produtividade. Além disso, seu controle é difícil e de alto custo, sobretudo por ser a erradicação de plantas infectadas, seguida de queima, a principal prática em áreas contaminadas. Devido à sua importância, recentemente a bactéria teve seu genoma completamente seqüenciado, onde foram identificados, por homologia de seqüência de proteínas, várias ORFs ("open reading frames") associadas diretamente ao processo de infecção. Dentre elas, várias seqüências que teoricamente codificam para proteínas envolvidas na degradação da parede celular, o que pode ser um indicativo de que a bactéria utiliza mecanismos relacionados a este evento durante o seu processo infeccioso e de adaptação. Entretanto, não há até o momento informação experimental a respeito da funcionalidade de seqüências em X. axonopodis pv. citri que permitam a degradação da parede celular; adicionalmente, há a possibilidade de ocorrência de genes exclusivos para a bactéria para esta atividade e que, por isso, não tenham apresentado homologia com quaisquer genes já catalogados. O objetivo principal deste trabalho é identificar funcionalmente, em X. axonopodis pv. citri, através de ensaios in vitro e in vivo, genes envolvidos na produção ou transporte de proteínas relacionadas à degradação de parede celular de plantas de citros e identificar a sua relevância na capacidade infectiva ou adaptativa da bactéria. Com isso, há a possibilidade posterior de identificação de novos alvos para o combate à bactéria e, portanto, maiores perspectivas de manejo da doença. Para tal, serão produzidos mutantes a partir de inserção sítio-dirigida e inserção randômica de transposon com uma coleção que será submetida à seleção em placa para identificação de degradação de composto celulósico, com posterior identificação genética através de seqüenciamento, e teste de adaptação e virulência em planta. (AU)