Avaliação da influência do extrato de aroeira na adesão e proliferação por fibroblatos humanos e expressão de MMP-2 e 9 in vitro

Resumo

O Brasil apresenta uma biodiversidade de plantas do cerrado o que facilita seu estudo por pesquisadores em diversas áreas. A aroeira (Astronium urundeuva) é uma dessas plantas que vem sendo estudada não só na medicina, como também na odontologia, com potencial poder antiinflamatório e antimicrobiano, além de favorecer o processo de reparo. Assim, esse projeto tem como objetivo principal realizar a caracterização do extrato de aroeira e avaliar a influência de diferentes concentrações do extrato aquoso de aroeira na adesão e proliferação de fibroblastos humanos (linhagem FGH), além da expressão das metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMP-2 e MMP-9) in vitro. A caracterização da aroeira será feita por meio do processo de triagem cromatográfica e pelo método HPLC analítico - "Fingerprint". Serão plaqueadas 3x103 células-poço em 10 placas de 24 poços. O meio de cultivo será substituído por meio de cultura de Eagle modificado por Dullbecco complementado por 10% soro fetal bovino (SFB) em diferentes concentrações do extrato hidroalcoólico de aroeira (extrato puro; 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10000). Cada placa será analisada em um tempo experimental que será de 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a adição do meio condicionado. Após cada período experimental, o meio de cultura contendo o extrato de aroeira aquoso será removido, as células serão lavadas com PBS-A e divididas para realização das diferentes análises. As amostras coletadas serão avaliadas quanto a viabilidade celular por meio dos testes de atividade mitocondrial das células sendo realizado pelo método da redução do MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazólio), captação do vermelho neutro, coloração das células pelo método do cristal violeta. Será feita a análise das proteínas MMP-2 e 9 pelo método de Western Blot, bem como sua atividade por meio da zimografia. Os transcritos das MMP-2 e 9 serão quantificados pelo Real Time PCR. Os valores serão analisados pelo método ANOVA, complementado pelo teste de Tukey e análise de Kruskal-Wallis complementada pelo teste de Dunn, quando obedecerem à distribuição normal e não-normal, respectivamente. O nível de significância adotado será o de 5% (p<0,05). (AU)