Estudo do mecanismo de regulação da expressão gênica pelo regulador Fur em Klebsiella pneumoniae: implicações na expressão de fatores de virulência mediada por quorum-sensing

Resumo

Klebsiella pneumoniae é uma bactéria patogênica gram-negativa que causa uma variedade de infecções, tais como pneumonia, meningite, septicemia, entre outras. Sendo um patógeno oportunista, acomete particularmente doentes imunologicamente deprimidos e apresenta-se como uma das principais causas de infecções hospitalares. Nos anos recentes, tem sido observado um aumento na resistência aos antibióticos por algumas linhagens de K. pneumoniae. Em adição a isso, o crescente aumento de casos de infecções severas em indivíduos saudáveis tem enfatizado a importância do estudo dos mecanismos de virulência que determinam a patogenicidade de K. pneumoniae. Considerando que o ferro desempenha um importante papel na virulência de bactérias patogênicas, este projeto tem por objetivo a identificação e caracterização de genes associados à virulência e ao quorum-sensing em K. pneumoniae cuja expressão é controlada por ferro por intermédio do regulador Fur. A identificação de genes regulados por Fur será feita a partir da investigação de novas sequencias reguladoras do regulador Fur (novos boxes Fur) na região promotora dos genes candidatos. Os prováveis boxes identificados serão validados e caracterizados pela técnica de EMSA. Os genes contendo box Fur validado terão o padrão de expressão avaliado por PCR em tempo real a partir de células de K. pneumoniae mantidas na presença ou ausência de ferro. Por fim, a modelagem molecular por homologia da proteína Fur de K. pneumoniae poderá fornecer informações valiosas quanto ao mecanismo de ação do regulador Fur quando complexado às suas respectivas sequencias reguladoras. (AU)