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Desenvolvimento de PCR em tempo real (PCR-RT) para detecção rápida de Escherichia coli diarreiogênica

Processo: 08/11467-9
Modalidade de apoio:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de abril de 2009 - 30 de setembro de 2011
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
Pesquisador responsável:Isabel Cristina Affonso Scaletsky
Beneficiário:Isabel Cristina Affonso Scaletsky
Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Escherichia coli  Citotoxicidade  Diarreia  Técnicas de diagnóstico molecular  Reação em cadeia da polimerase em tempo real 
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Diarréia | Escherichia coli | Rt-Pcr | Epidemiologia e detecção de E. coli diarreiogênica

Resumo

No Brasil, as Escherichia coli patogênicas ainda estão entre as causas mais importantes de diarreia aguda, particularmente em crianças. Com os conhecimentos biológicos, clínicos e epidemiológicos mais aprofundados, foram estabelecidas seis categorias diferentes de E. coli diarreiogênica (DEC): E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteroinvasora (EIEC), E. coli enterohemorrágica (EHEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli que adere difusamente (DAEC). A identificação das diferentes categorias de DEC representa um desafio, pois apenas o uso de testes bioquímicos e provas sorológicas na detecção de algumas categorias não é o suficiente. Portanto, devem ser utilizados testes fenotípicos, entre eles testes de aderência em células HEp-2 e ensaios de citotoxidade, e genotípicos como hibridização de ácidos nucléicos e reação em cadeia pela polimerase (PCR). Recentemente, foram desenvolvidos PCRs multiplex para a detecção das diferentes categorias de DEC numa única reação. A técnica de PCR em tempo real (PCR-RT) é o maior avanço em diagnostico molecular de infecções, que permite amplificação e detecção simultânea dos produtos de PCR, resultando na redução do risco de contaminação e no tempo de obtenção do resultado. Este projeto tem como objetivo adaptar ensaios de PCR multiplex desenvolvidos em nosso laboratório para a técnica PCR-RT, possibilitando uma detecção mais rápida de E. coli diarreiogênica. (AU)

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