Sintese de tireotrofina humana (r-htsh) em celulas cho "humanizadas", capazes de introduzir a ligacao alfa-2,6 entre o acido sialico e a galactose.

Resumo

A glicosilação é uma modificação pós-traducional que pode afetar profundamente as características das glicoproteínas como sua atividade biológica e propriedades farmacológicas. Na tentativa de expressar a tireotrofina humana recombinante (r-hTSH) em células hospedeiras cujas características de glicosilação, particularmente de sialilação, são mais semelhantes às células humanas, nos propomos estudar uma tireotrofina derivada de células de hamster chinês (CHO) modificadas com a introdução do gene que codifica a enzima α2,6 sialiltransferase. Estas células, portanto, possuem os mecanismos necessários para a ligação do ácido siálico terminal com a galactose, na conformação α2,6, além da α2,3 já presente na cepa selvagem. Ressaltamos de fato que enquanto as células hipofisárias humanas possuem a capacidade de sialilar o hTSH em posição α2,6 e α2,3, as células CHO somente sialilam em α2,3. O r-hTSH atualmente usado como biofármaco difere portanto do produto natural nesta característica, entre outras. De acordo com a nomenclatura vigente na literatura definimos seja as células CHO, assim modificadas, que o hTSH obtido, como "humanizados". Já foi desenvolvida, no Centro de Biotecnologia do IPEN-CNEN/SP, a síntese e purificação do r-hTSH a partir de células CHO sem esta modificação, tendo sido, a este respeito, depositada Patente em cotitularidade com a FAPESP e publicados diversos trabalhos. O objetivo principal do presente trabalho é, portanto, sintetizar, purificar e caracterizar um hTSH "humanizado" derivado de uma linhagem celular hospedeira com novas características de glicosilação e compará-lo com a preparação natural hipofisária e com o r-hTSH desenvolvido por nós anteriormente, quanto à atividade biológica in vivo e à presença de estruturas α2,3 e α2,6 na ligação ácido siálico-galactose, obtendo assim um produto farmacêutico mais próximo ao natural. (AU)