Síntese de peptídeos e bibliotecas de peptídeos para o estudo de proteases

Resumo

Desde 1980, como uma aplicação da síntese de peptídeos em solução instalamos nos laboratórios de síntese de peptídeos do Dept. Biofísica da UNIFESP, preparamos os primeiros substratos cromogênicos para proteases. A seguir desenvolvemos metodologia própria e original para síntese de substratos fluorescentes, do tipo das cumarinas. E finalmente a nossa mais expressiva contribuição foi o desenvolvimento de peptídeos de fluorescência apagada por transferência de energia por ressonância (FRET) usando o ácido orto-aminobenzóico (Abz) e o N-[2,4-dinitrofenil]-etilenodiamino como par doador/receptor de fluorescência, respectivamente. Estes peptídeos foram inicialmente sintetizados por nós, pelos métodos clássicos em solução e em seguida adaptamos a obtenção destes peptídeos para síntese em fase sólida convencional e posteriormente para síntese paralela. Desde 1993 através dos projetos temáticos FAPESP, conseguimos estabelecer as condições mais modernas de síntese de peptídeos em fase sólida, que nos permite a contribuir na área de substratos e inibidores de proteases. Além disso, estamos sintetizando peptídeos para vários grupos nacionais e internacionais de nosso meio. A nossa capacidade de síntese e analise de peptídeos atingiu 1620 seqüências em 2007 e 890 até maio de 2008 de tamanho que variaram de 9 a 40 resíduos de aminoácidos. Todos os peptídeos são sintetizados por síntese de peptídeo em fase sólida usando máquinas automatizadas instaladas em 1994 ou sistemas manuais para síntese simultânea de um grande número de peptídeos. Todos os peptídeos são purificados por HPLC e caracterizados por espectroscopia de massa do tipo MALDI-TOF ou LC-MS, seqüenciamento de aminoácidos por degradação de Edman ou análise da composição de aminoácidos quando necessário. Hoje necessitamos substituir alguns equipamentos para continuar a produzir peptídeos e assim dar continuidade no estudo da especificidade das proteases que estão sendo clonadas e expressas e fornecer peptídeos aos nossos colaborados nacionais e internacionais. (AU)