Análise da taxa de mutação do vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) em ciclo único de infecção in vitro

Resumo

Os vírus da imunodeficiência humana tipos 1 e 2 (HIV-1 e HIV-2) são retrovírus nos quais a diversidade genética é muita alta. Esta diversidade é gerada por processos biológicos inerentes aos próprios vírus, sendo em grande parte consequência da falta de atividade revisora da enzima transcriptase reversa (TR). Outras características que interferem na geração de sua heterogeneidade genética são, por exemplo, a recombinação entre vírus de cepas distintas e a alta taxa de replicação viral no hospedeiro. Com esta diversidade genética, estes vírus são capazes de evadir das ações do sistema imune humano e sobrepujar o efeito dos medicamentos empregados. Tal propriedade dificulta ainda o desenvolvimento de vacinas e novas drogas antiretovirais. As taxas de mutação do genoma do HIV-1 foram estimadas com emprego de transcriptase reversa purificada ou sistema de infecção de ciclo único nos quais sequências curtas foram usadas como modelo. Estas sequências muitas vezes foram derivadas de outros organismos. Noutros estudos, as técnicas de detecção das mutações foram baseadas em característica fenotípica em sistema bacteriano. Assim, a taxa de mutação do HIV-1 pode ter sido erroneamente avaliada.Pretendemos avaliar a taxa de mutação do HIV-1 diretamente, pela análise de seqüências longas obtidas de provírus. Células mononucleares do sangue periférico humano serão infectadas em ciclo único, de onde obteremos o ADN proviral. Realizaremos o seqüenciamento de região do genoma com aproximadamente 600 pares de bases (gene env). A partir destes resultados calcularemos a freqüuência de mutação/base/ciclo replicativo. (AU)