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Caracterização bioquímica, estrutural e biológica de uma PLA2 secretória classe III isolados de cnidários marinhos da espécie Bunodosoma caissarum

Resumo

Neste projeto pretendemos isolar uma nova proteína Fosfolipase A2 secretória (sPLA2; PLA2) classe III isolada de extratos de nematocistos obtidos de cnidários da espécie Bunodosoma caissarum que serão coletados no estuário de Santos São Vicente. Além do isolamento da proteína previsto neste projeto, pretendemos determinar características estruturais desta proteína em relação a sua seqüência de aminoácidos ou seja, a determinação de sua estrutura prim, pi e massa molecular inativa. Uma vez isolada a PLA2 pretendemos realizar a determinação do comportamento cinético desta enzima usando o NOBA como substrato cromogênico e a caracterização de determinados parâmetros cinéticos com Vmax, Km, pH ótimo, efeito da temperatura e o efeito de determinados inibidores tais como brometo de p-bromofenacil (p-BPB), cumartnas sintéticas (Cum) que são potenciais inibidores de PLA2. Serão também utilizadas técnicas espectrométricas de dicroísmo circular e fluorescência específica de tripotofanos para determinar alguns parâmetros estruturais das PLA2 nativas bem como sobre o efeito das drogas acima mencionado sobre a estrutura e função desta PLA2 classe III isolada do nematocisto de Bunodosoma caissarum. Do ponto de vista biológico pretendemos analisar o efeito destas PLA2 na indução de edema de pata e sobre a degranulação de mastócitos, utilizando proteínas isoladas de PLA2 de Bunodosoma caissarum. Estas análises sobre a capacidade edematogênicas das PLA2 também serão estudadas em presença de determinados inibidores como p-BPB e de cumarinas com potencial atividade anti-inflamatória, bem como em presença de inibidores das ciclooxigenases e das PLA2 citossólicas. Outro ensaio que pretendemos avaliar neste projeto o efeito destas PLA2 da classe III sobre a agregação plaquetária, utilizando tanto o sistema de plaquetas lavadas como de plasma rico em plaquetas. (AU)

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