Isolamento e caracterização de genes de virulência e resistência do metagenoma do biofilme dentário por expressão heteróloga em Escherichia coli

Resumo

A complexidade da microbiota presente no biofilme dentário e os variados quadros clínicos da periodontite ressaltam a necessidade de investigações mais aprofundadas sobre os mecanismos de patogenicidade que esta desempenha. Ademais, a emergência de novas linhagens resistentes de bactérias evidencia a importância de estudos que propiciem o desenvolvimento de estratégias de controle de sua disseminação e auxilie na formulação de novos antimicrobianos. Estudos prévios têm demonstrado a análise metagenômica por expressão heteróloga pode revelar biomoléculas previamente desconhecidas com elevada importância médica, odontológica e biotecnológica. O objetivo do presente projeto é o isolamento e a caracterização molecular de genes de virulência e resistência do metagenoma do biofilme dentário periodontopatogênico. Para tanto, serão empregadas amostras de biofilme dentário supra e sub-gengival de 20 pacientes portadores de periodontite. A metodologia englobará a extração de DNA metagenômico, clonagem em vetor plasmidial, transformação em Escherichia coli, e expressão heteróloga de proteínas de interesse. As colônias bacterianas com atividade diferenciada em placas de cultura terão o DNA plasmidial extraído e seqüenciado. As sequências de DNA obtidas serão submetidas à análise computacional em bancos de dados de domínio público. Através desta metodologia, visa-se isolar, identificar e caracterizar biomoléculas potencialmente novas, as quais podem contribuir para um melhor entendimento dos mecanismos patogênicos da periodontite, bem como para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas específicas a esta patologia oral. (AU)