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Comparação morfológica, proliferativa e da síntese de colágeno e MMPs entre fibroblastos e miofibroblastos do estroma de carcinomas espinocelulares orais e análise da influência dos miofibroblastos na invasão e formação de tumores em modelo xenográfico

Resumo

Miofibroblastos são caracterizados pela expressão de níveis elevados de fatores de crescimento, proteases e proteínas da matriz extracelular, que podem influenciar a progressão tumoral. Recentes estudos encontraram miofibroblastos no estroma de vários tipos de cânceres humanos, incluindo os de mama, rim, fígado, bexiga, cólon e próstata, sendo a presença de miofibroblastos frequentemente associada a um pior prognóstico. Nós previamente demonstramos que miofibroblastos estão principalmente localizados nos frontes invasivos dos carcinomas espinocelulares (CEC) orais, onde controlam o comportamento tumoral por induzir a proliferação das células neoplásicas. Os objetivos deste projeto são comparar as características morfológicas e funcionais dos fibroblastos e miofibroblastos presentes no estroma de CECs orais e determinar a influência destas células na invasão e formação tumoral. Linhagens celulares de fibroblastos e miofibroblastos tumorais serão estabelecidas de CECs orais e comparadas no que tange as características morfológicas (análise por microscopia de contraste de fase e coloração de H&E), potencial proliferativo (por ensaios de crescimento celular e incorporação de bromodeoxiuridina), síntese de colágeno (por ensaios de RT-PCR e ELISA), expressão de metaloproteinases de matriz (por ensaios de RT-PCR, western blot e zimografia) e expressão de marcadores de diferenciação celular (por imunofluorescência). A influência dos fatores de síntese dos fibroblastos e miofibroblastos tumorais na indução da invasão das células neoplásicas será comparada pelos métodos matrigel/transwell e co-culturas em base de colágeno. O modelo de crescimento de tumores xenográficos em camundongos nude será utilizado para determinar a influência dos miofibroblastos na formação e progressão tumoral. (AU)

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