Estudo do papel da proteína anexina 1 e dos receptores para peptídeos formilados (FPR) no carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço

Resumo

Várias evidências demonstram que o desenvolvimento e a progressão do câncer dependem não somente de suas características genéticas, mas também de interações das células tumorais com o estroma, incluindo os elementos inflamatórios. A proteína antiinflamatória anexina 1 (AnxA1) tem sido associada com a progressão em alguns tumores invasivos, sugerindo um papel na regulação da migração/invasão das células epiteliais. Recentes estudos, propostos para entender a terapia antiinflamatória, têm sugerido que a ação regulatória da AnxA1, sobre a migração leucocitária, pode ser mediada por meio dos receptores para peptídeos formilados (nFPRs). Em função desses dados, será relevante pesquisar os mecanismos de ação da AnxA1 e dos receptores nFPRs nas células tumorais, epiteliais e inflamatórias do carcinoma epidermóide de laringe humano e, in vitro, nas células epiteliais (derivadas da linhagem celular Hep-2) e nos fibroblastos preservados em diferentes meios de cultura, inclusive o tratado com o peptídeo Ac2-26 (segmento N-terminal da proteína AnxA1). Inicialmente, analisaremos quantitativamente os leucócitos e os mastócitos e, a co-localização ultra-estrutural da AnxA1 com os receptores nFPRs, nas células tumorais, epiteliais e inflamatórias, em amostras teciduais de laringe controle, tumoral e região adjacente ao tumor do mesmo paciente. Nos estudos in vitro investigaremos a ação do peptídeo Ac2-26, do glicocorticóide dexametasona e do Boc2 (antagonista dos receptores nFPRs) na proliferação das células Hep-2. Após os diferentes tratamentos verificaremos a co-localização ultra-estrutural da AnxA1 com os receptores nFPRs, a expressão da AnxA1 e dos receptores em Western blotting. Ainda analisaremos a ação do peptídeo no índice de proliferação celular quando utilizados os meios condicionados de descarte de cultivo das células Hep-2 e fibroblastos, para avaliar os efeitos dos fatores solúveis. Nos diferentes meios de cultura, analisaremos nas células Hep-2 e nos fibroblastos, a localização ultra-estrutural da AnxA1, a cascata de sinalização ERK e FAK, a correlação deste evento com os fatores de crescimento (EGF-EGFR) e a molécula de adesão celular (integrina ²1, CD29) pela técnica de Western blotting e, a expressão do mRNA da proteína AnxA1, por meio da técnica de real time PCR. Com essas considerações, o estudo da proteína antiinflamatória AnxA1 e de sua interação com receptores nFPRs, nas células tumorais, epiteliais e inflamatórias, será extremamente importante, pois os mecanismos de ação pelos quais a proteína atua na biologia tumoral são pouco conhecidos e, considerando o seu papel nos processos antiinflamatórios/antiproliferativos, poderá ocasionar novas descobertas terapêuticas no tratamento de processos neoplásicos. (AU)