Clonagem e expressão de diferentes proteínas do vírus da imunodeficiência felina para utilização no ELISA indireto e imunocromatografia para detecção de anticorpos

Resumo

O vírus da imunodeficiência felina (FIV) é um importante agente causador de distúrbios imunológicos associado a infecções oportunistas e neoplásicas, que podem ser fatais. Os gatos infectados podem permanecer assintomáticos durante longos períodos, além de apresentar uma grande variedade de sinais clínicos, por isso são necessários métodos diagnósticos laboratoriais específicos. O diagnóstico pode ser realizado por isolamento viral. PCR, e testes sorológicos como Imunofluorescência (IFA), Western blotting (WB) ou pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Atualmente, existem "kits" comerciais disponíveis baseados no ELISA que possuem o antígeno p24 imobilizado na fase sólida. O presente projeto tem como objetivo expressar os seguintes antígenos do FIV: a) o antígeno de capsídeo (CA) e o epítopo transmembrana (TM) como proteína de fusão; b) o antígeno de capsídeo; c) o antígeno transmembrana e d) o antígeno de matriz, em E. coli, e padronizar um novo ELISA, para detecção de anticorpos anti-FIV, utilizando esses antígenos recombinantes. O antígeno de fusão, conforme trabalhos recentes, apresenta, no ELISA, melhor especificidade e sensibilidade que aqueles baseados apenas em p24. Entretanto a combinação dos antígenos poderá melhorar ainda mais essa sensibilidade e especificidade. A produção desses antígenos em vetor de expressão procaripta como proteína de fusão com a cauda de histidina facilitará sua purificação e propiciará a obtenção desse antígeno a baixo custo, o que permitirá também o desenvolvimento de um ELISA indireto de baixo custo que poderá ser disponibilizado para os clínicos veterinários. A padronização de um teste rápido baseado na imunocromatografia possibilitará o desenvolvimento de kits rápidos para substituição do kit importado atualmente em uso no Brasil. Importante ressaltar que a clonagem e expressão do antígeno de capsídeo/epítopo transmembrana já foram realizados como tema de mestrado (defendido em 26/06/09) da doutoranda que colabora nesta pesquisa. Este projeto é uma continuidade pois os testes preliminares com poucos soros mostraram-se bastante promissores. (AU)