Validação da PCR multiplex na detecção e identificação de Candida spp. em infecções de corrente sanguínea de pacientes pediátricos internados em unidades de terapia intensiva

Resumo

As infecções sistêmicas causadas por Candida spp. representam importante causa de morbidade e mortalidade em pacientes pediátricos internados em UTIs. Os métodos convencionais de cultivo apresentam sensibilidade limitada e demandam tempo prolongado para a identificação das espécies infectantes. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) requer pequenos volumes de sangue para análise, situação ideal para crianças gravemente enfermas, propiciando diagnóstico rápido e preciso. Este estudo tem como objetivo validar a técnica de PCR multiplex, para identificar sete espécies de Candida em amostras de sangue de pacientes pediátricos com risco de desenvolver fungemia, e verificar o grau de concordância dos resultados com as hemoculturas. Serão analisadas amostras sanguíneas de 30 pacientes recém-nascidos e de 30 pacientes com idade entre 30 dias e 20 anos incompletos, internados em UTIs do Instituto da Criança (ICr) - HCFMUSP, que apresentarem condições clínicas com risco de desenvolver candidemia. O grupo controle será constituído de 30 crianças sem doenças infecciosas, internadas no ICr para cirurgias de pequeno porte. Serão determinados os limiares de detecção e especificidade do sistema de amplificação com primers espécie-específicos. As amostras de DNA extraídas do sangue dos pacientes serão submetidas às PCR e os produtos amplificados analisados por eletroforese em géis de agarose. A concordância entre os resultados obtidos pelas hemoculturas e pelas PCR será avaliada pelo teste de McNemar. Para resultados que forem positivos somente pela técnica molecular, os produtos serão submetidos ao seqüenciamento automatizado. (AU)