Resposta inflamatória e expressão gênica dependente do componente C5 em lesão hepática de camundongo

Resumo

Sub-Projeto 1. Neste trabalho estudaremos a influência do componente C5 do complemento na resposta inflamatória e expressão gênica de hepatócitos de camundongos suficientes e deficientes para a proteína C5. Estudos recentes mostram que o sistema complemento apresenta outras funções além daquelas estabelecidas como importante colaborador da imunidade inata e adaptativa. As novas funções, que abordaremos, estão relacionadas à homeostase hepática frente a injúrias tóxicas bem como regeneração tecidual e estímulo para divisão celular. Até então estas novas atividades são regidas por fragmentos de proteínas centrais como C3 (C3a) e C5 (C5a) e também pelos receptores, encontrados nas superfícies celulares, para os respectivos fragmentos. Depois de estabelecida a linhagem C57Black C5-/-, e sua correspondente genética C57Black6 C5+/+, iremos submetê-las a um tratamento crônico, por 4 semanas, com ração rica em gordura e contendo etanol. Os controles serão tratados com a mesma ração contendo dextrose, como equivalente calórico, ou com a ração contendo apenas contendo água. A resposta inflamatória será avaliada pela presença de infiltrado inflamatório no fígado. A quantificação plasmática da concentração de transaminases hepáticas será empregada para caracterizar a presença de lesão juntamente com a análise histopatológica do fígado. As citocinas IL-6, IL-10, IL-12 e TNF-alfa também serão analisadas. Uma parte deste órgão será destinada à extração de RNA total, que será empregada em análise da variação da expressão gênica nestes animais com lesão hepática pelo etanol e controles, por meio da técnica de microarranjos. Sub-Projeto 2: Recentemente estudamos uma família brasileira deficiente de Fator H, onde células do paciente apresentavam um retardo na secreção desta importante proteína reguladora da via alternativa. Este defeito era provocado pela substituição Arg127 por His127 do Fator H. Neste projeto queremos entender a importância da Arg127 para o deslocamento desta proteína nos compartimentos intra-celulares. Quase nada se conhece sobre os requisitos estruturais de proteínas do sistema complemento, necessários depois de sua síntese e processamento no citoplasma até a sua secreção. Pretendemos comparar a localização de Fator H selvagem e mutante em fibroblastos de indivíduo normal e paciente, respectivamente. Além disso, transfectaremos células Cos-7 (fibroblastos de macaco) com vetores contendo cDNAs de Fator H selvagem e mutante para confirmar os resultados. Sub-projeto 3. O sistema complemento participa dos mecanismos efetores envolvidos com a citotoxicidade de células tumorais provocados diretamente pela formação de células natural killer (NK), macrófagos, e polimorfonucleares. A presença de tumores pode provocar a ativação deste sistema sobre a superfície celular, onde várias moléculas do sistema complemento são depositadas após sua ativação. O uso de anticorpos monoclonais tem sido usado no combate de células neoplásicas e um dos mecanismos efetores decorrente deste imunoterápico é dependente da ativação deste sistema complemento. Investigaremos no soro de pacientes com diagnóstico recente de câncer de próstata, se há alterações funcionais do sistema complemento para avaliarmos se falhas neste sistema poderiam propiciar condições para a carcinogênese. (AU)