Confirmação de uma possível nova forma de modificação pós-traducional de polipeptídeos mitocondriais

Resumo

Em projetos anteriores estudamos a biogênese mitocondrial, descrevendo a função de alguns genes tais como: COX23, COX24, COQ9, COQ10, ATP25 e COX21.Ao finalizar um primeiro estudo do gene COX21 , está claro seu efeito sobre os polipeptídeos mitocondriais Cox2p e Atp8p. No isolamento de alelos de COX21 sensíveis a temperatura, observou-se que na temperatura não permissiva Atp8p é logo degradado e Cox2p possui propriedades eletroforéticas diferenciadas do que até então havia sido descrito, sugerindo que Cox21p possa atuar pós-traducionalmente nesses polipeptídeos. A partir de uma biblioteca genômica, identificou-se também PET112 como um supressor genético do fenótipo de sensibilidade a temperatura dos alelos de COX21. A função de Pet112p em Saccharomyces cerevisiae foi recentemente relacionada a formação de um complexo com Her2p e Cox21p na transamidação de glutamil-tRNAGln gerando glutaminil-tRNAGln C. De fato, seu homólogo de procariontes pertence ao complexo GatABC há tempos caracterizado, mas até essa publicacação a literatura indicava que glutaminil-tRNA sintetase oriunda do citossol realizasse também a função mitocondrial.Nesse projeto buscaremos confirmar se o complexo Cox21-Pet112-Her2p, realiza uma segunda função mitocondrial, modificando pós-traducionalmente alguns poplipeptídeos mitocondriais. Essa distinção é prioritária, pois com a revelação da existência do complexo Cox21-Pet112-Her2p pode-se aventar que os fenótipos bioquímicos caracterizados para os mutantes condicionais cox21 são decorrentes da incorporação errônea de glutâmico no lugar de glutamina em todas proteínas mitocondriais, e por alguma razão Cox2p e Atp8p teriam tais modificações mais facilmente detectáveis. Através do estudo das enzimas citossólicas glutaminil-tRNA sintetase e glutamico-tRNA sintetase, bem como após geração de mutantes condicionais para PET112 e HER2 procuraremos elucidar essas questões. (AU)