Estudo do efeito da fototerapia com laser em baixa intensidade sobre células-tronco obtidas de polpa de dentes decíduos

Resumo

A polpa dentária é um tecido conjuntivo frouxo composto por matriz extracelular e tipos celulares como fibroblastos, células nervosas, vasculares e indiferenciadas. Estudos mostraram que as células indiferenciadas da polpa dentária podem atuar como células-tronco adultas multipotentes, capazes de se diferenciarem em diversos tipos celulares. O potencial de células-tronco de polpa dental humana (Dental Pulp Stem Cell - DPSC) para utilização em engenharia tecidual com vistas à produção de tecidos, a exemplo da dentina, da cartilagem e do osso, é grande e, por isso, há um grande interesse de se isolar e estudar essas células. A fototerapia com laser em baixa intensidade (FTLBI) tem demonstrado capacidade de modular o crescimento, a viabilidade celular e a diferenciação de tipos celulares como fibroblastos, osteoblastos e células endoteliais, entre outros. Vale ressaltar que a taxa de crescimento, a viabilidade celular e a capacidade de expansão das DPSC são aspectos importantes, principalmente quando o objetivo do cultivo das mesmas é a implantação em órgãos humanos durante as terapias celulares. Existem alguns estudos in vitro analisando os efeitos da FTLBI em células-tronco de origem mesenquimal, a exemplo das células-tronco de medula óssea e as derivadas de tecido adiposo, entretanto, pouco se sabe sobre os efeitos desta terapia sobre células-tronco provenientes da polpa dental humana. O entendimento de como a FTLBI poderia influenciar o crescimento, a viabilidade e o estágio de diferenciação das DPSC permitirá, futuramente, o emprego desta terapia em estudos relacionados à regeneração de tecidos dentais e ósseos, entre outros. Portanto, o objetivo deste projeto é avaliar a influência da FTLBI na proliferação celular e na expressão de marcadores de células-tronco. Mais especificamente iremos avaliar a influência de diferentes parâmetros da FTLBI sobre o comportamento biológico de culturas de células-tronco oriundas de polpa de dentes decíduos humanos (DPSC). Para tanto pretendemos obter culturas de DPSC. E a seguir, detectar os marcadores de células-tronco destas linhagens utilizando as técnicas de imunofluorescência, citometria de fluxo e Western blot e verificar seus padrões de proliferação celular. A partir desta caracterização das células, passaremos a testar a influência da FTLBI sobre a expressão dos marcadores de DPSC. Adicionalmente iremos buscar a determinação dos parâmetros da FTLBI capazes de influenciar a proliferação das DPSC. Os dados de citometria de fluxo e de Western blot, bem como os padrões de proliferação observados após a FTLBI serão comparados estatisticamente com os dados da caracterização inicial das linhagens de DPSC (p