Proteases, inibidores naturais e recombinantes de sementes de Caesalpinia echinata (pau-brasil): interações em processos inflamatórios e neurodegenerativos, com modulação por glicosaminoglicanos

Resumo

As proteases participam em processos biológicos normais e no desenvolvimento de inúmeras doenças. Um dos nossos interesses tem sido estudar eventos dos quais algumas dessas enzimas participam, como no sistema calicreína-cininas (SCC), coagulação sanguínea, fibrinólise e apoptose. A ação das proteases pode ser controlada, por exemplo, pela formação de complexos com inibidores proteicos e modulada por componentes da matriz extracelular como glicosaminoglicanos (GAG). Já purificamos e caracterizamos inibidores de calicreína plasmática (CeKI), elastase (CeEl) e catepsina B (CeCBI) presentes nas sementes de Caesalpinia echinata (pau-brasil); CeKI e CeEI foram utilizados com sucesso em modelos de inflamação e edema pulmonar. Já estudamos a influência dos GAG na ação da calicreina plasmática sobre substratos naturais e sintéticos, na ativação do SCC na superfície e matriz extracelular de células endoteliais e em um modelo de inflamação em pata de rato. Também vimos o envolvimento das cininas e seus receptores em um modelo da doença de Alzheimer em ratos. No presente projeto, pretendemos: a) Extrair proteases de sementes de C. echinata em diversas formas de armazenamento, para avaliar o envolvimento dessas enzimas e seus inibidores com a capacidade germinativa das sementes; b) Purificar o inibidor recombinante de elastase (rCeEl), estabelecer a menor porção ativa da molécula do inibidor e testar essa substância em modelos de edema pulmonar e psoríase; c) Verificar a expressão da elastase e da catepsina B no modelo de psoríase; d) Como a elastase hidrolisa o cininogênio (componente do SCC), verificar a influência de alguns GAG na atividade proteolítica da elastase, bem como em um modelo de apoptose em células epiteliais; e) Verificar a ação de inibidores de proteases, como o CeKI e o CeEI, em modelos de processos inflamatórios e neurodegenerativos, inflamatórios e neurodegenerativos. (AU)