Imunizacao pre-clinicas utilizando recombinantes baseadas em antigenos da superficie de merozoitas de plasmodium vivax.

Resumo

Nos últimos anos produzimos diversas proteínas recombinantes baseadas na região C-terminal (19kDa) da Proteína 1 da Superfície do Merozoíta de Plasmodium vivax (MSP119) a partir de diferentes sistemas de expressão em Escherichia coli (CUNHA et al., 2001), Saccharomyces cerevisiae (SOARES et al., 1999a) e Pichia pastoris (SOARES & RODRIGUES, 2002). Estas proteínas recombinantes foram utilizadas para a imunização de camundongos C57BL/6 na presença de diferentes formulações de adjuvantes (CUNHA et al., 2001; SOARES & RODRIGUES, 2002; ROSA et al., 2004). Observamos que uma das proteínas baseadas na MSP119, a qual contem o epítopo universal PADRE, foi capaz de induzir títulos de anticorpos tão altos quanto aqueles gerados pela imunização na presença de ACF/AIF em termos de magnitude, afinidade, subclasses de IgG e longevidade. O que nos levou a concluir que, na ausência de adjuvantes potentes como o ACF/AIF, a presença do epítopo PADRE aumenta consideravelmente a resposta de anticorpos induzida pela proteína recombinante MSP119 (CUNHA et al., 2001; ROSA et al., 2004).Muito recentemente, demonstramos que uma nova proteína recombinante contendo, além da MSP119, dois epítopos “helper” reconhecidos por linfócitos T (PADRE e um novo epítopo interno da MSP-1 de P. vivax - DYDVVYLKPLAGMYK) foi altamente imunogênica em macacos (Callithrix jaccus jaccus) quando administrada na presença de AIF (ROSA et al., in press). Com base nestes resultados, estamos propondo neste projeto dar continuidade as imunizações pré-clínicas em camundongos utilizando como base as proteínas recombinantes derivadas da MSP119 e do Antígeno 1 de Membrana Apical de P. vivax (PvAMA-1), o qual foi caracterizado recentemente pelo nosso grupo como sendo altamente imunogênico em infecções naturais (RODRIGUES et al., 2005). É nosso intuito aprofundar os estudos de imunogenicidade da MSP119 recombinante em camundongos visando comparar o efeito da administração do antígeno pela via mucosa (intranasal) e via subcutânea. Além disso, pretendemos gerar uma nova proteína recombinante de fusão contendo a MSP119 na região C-terminal da flagelina de Salmonella typhimurium, a qual tem sido proposta como adjuvante em imunizações. Este recombinante será utilizado para estudos de imunogenicidade em camundongos pelas vias de mucosa (intranasal) e subcutânea.No que se refere à PvAMA-1, iniciaremos às imunizações experimentais utilizando um recombinante correspondente ao ectodomínio da proteína, o qual tem sido produzido rotineiramente pelo nosso grupo a partir do sistema bacteriano de expressão (RODRIGUES et al., 2005). Alternativamente, utilizaremos também para imunização proteínas recombinantes correspondentes aos subdomínios da PvAMA-1, os quais foram gerados muito recentemente pelo nosso grupo (manuscrito em preparação). O nosso objetivo é avaliar a imunogenicidade da PvAMA-1 em camundongos na presença de diferentes formulações de adjuvantes, a fim de selecionar algumas combinações antígeno-adjuvante para serem utilizadas em futuras imunizações de primatas não humanos (Callithrix jaccus jaccus). É nosso intuito avaliar também, à médio prazo, a eficiência da imunização simultânea com os antígenos PvAMA-1 e PvMSP119-PADRE em macacos na presença dos adjuvantes selecionados nas imunizações individuais com cada um deles. (AU)