Determinação dos sítios subcelulares de produção de espécies reativas de oxigênio e óxido nítrico em cultura de células musculares utilizando sondas fluorescentes e sua aplicação in vivo em combinação com a técnica de microdiálise: efeito dos ácidos graxos

Resumo

As EROs e NO exercem funções importantes no tecido muscular, como a regulação do fluxo sanguíneo, metabolismo de glicose e da força de contração. Contudo, pouco se sabe sobre a formação intracelular dessas espécies durante a atividade muscular. Evidências da produção dessas espécies in vivo são escassas devido a instabilidade dessas e a falta de um método adequado a situação experimental. A nossa proposta é de avaliar a participação das mitocôndrias, da enzima xantina oxidase (XO) e dos peroxissomos na produção subcelular de EROs e da enzima óxido nítrico síntase (NOS) na formação de NO durante contrações intensas in vitro utilizando cultura de células musculares. A produção mitocondrial de EROs será determinada com as sondas DCFH-DA e "MitoTracker Red". A participação da XO na produção intracelular de EROs será examinada através do inibidor da XO alopurinol. A participação dos peroxissomos será examinada pela incubação das células com ácidos graxos de cadeia longa, que se eleva no exercício. (AU)