Bases moleculares das propriedades cataliticas das enzimas.

Resumo

Enzimas possuem alta especificidade em relação ao substrato e a sua atividade catalítica é influenciada pelo pH. O estudo das bases moleculares destas propriedades pode contribuir para a construção de enzimas com aplicação biotecnológica. Para tal, utilizaremos uma beta-glicosidase e uma lisozima. Desenvolvemos um método para prever a especificidade de novos mutantes desta beta-glicosidase. Para testá-lo, tentaremos construir (via mutação sítio-dirigida), expressar e caracterizar a especificidade destes mutantes. O pH ótimo desta beta-glicosidase é modulado por meio de interações entre os aminoácidos do seu sítio ativo. Um destes resíduos (N329) será substituído via mutação sítio-dirigida e o efeito desta mutação no pH ótimo da beta-glicosidase mutante avaliado. O pH ótimo ácido das lisozimas digestivas pode ser modulado pela presença de uma serina e/ou deleção de um tripeptídeo próximo ao sítio ativo. Estas hipóteses serão testadas com a caracterização de uma lisozima digestiva que não apresenta esta serina e de mutantes onde o tripeptídeo foi introduzido por mutação sítio-dirigida. (AU)