Estudos moleculares do Trypanosoma cruzi e de sua interação com células e fatores do hospedeiro in vitro e in vivo

Resumo

O Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença de chagas, é um organismo de grande interesse médico e biológico. Embora a transmissão da doença de chagas esteja controlada nos Países do Cone Sul, o T. cruzi continua a ser transmitido em muitos Países da América Latina infectando 15-16 milhões de pessoas. Surtos de casos agudos de doença de chagas, por infecção oral, vêm ocorrendo em diferentes regiões do Brasil. A invasão da célula hospedeira pelo T. cruzi é uma etapa crucial na instalação da infecção no homem e hospedeiro vertebrados. A invasão de células de mamíferos por tripomastigotas metacíclicos e amastigotas do T. cruzi tem sido intensamente estudada pelo nosso grupo, inclusive a infecção oral in vivo e in vitro. Identificamos várias moléculas do parasita e estruturas da célula hospedeira que interagem na invasão e demonstramos que as diferentes formas do parasita infectam a célula hospedeira por mecanismos distintos. Tripomastigotas metacíclicos e amastigotas expressam na superfície moléculas estágio-específico, que lhes conferem propriedades para interações celulares diferenciadas. Os genes codificadores de proteínas de superfície estágio-específico foram clonados e caracterizados. Neste projeto temático pretendemos estudar, aos níveis moleculares e celulares, a interação entre o T. cruzi com células e fatores do hospedeiro in vitro e in vivo. O projeto envolve o estudo de moléculas e estruturas celulares previamente caracterizadas pelo nosso grupo assim como a identificação de novos componentes moleculares e celulares. Enfoque especial será dado à identificação na célula de mamíferos de receptores para as proteínas de superfície de formas metacíclicas e amastigotas. O tráfego intracelular do T. cruzi e as vias de sinalização serão estudados em modelos de co-infecção com outros tripanossomas e bactérias invasoras assim como em células de mamíferos transfectadas com diferentes genes. Os antígenos de superfície de tripomastigotas metacíclicos são codificados por famílias multigênicas. Pretendemos identificar os genes transcritos e traduzidos nas formas metacíclicas pelas técnicas de hibridização em micro arranjos de DNA e seqüenciamento parcial das proteínas por espectrometria de massa, respectivamente. Os mecanismos de recombinação responsáveis pela geração de variantes destas famílias multigênicas serão estudados em parasitas transfectados com cromossomos artificiais de T. cruzi, especialmente construídos para esta finalidade. Estes estudos poderão dar novas informações sobre os mecanismos de controle da expressão gênica neste parasita e sobre a evolução das famílias multigênicas. O projeto apresentado é essencialmente multidisciplinar, focado no estudo da infecção do hospedeiro vertebrado pelo T. cruzi. A equipe proponente incluí pesquisadores com larga experiência em Biologia molecular, Biologia celular, Imunologia, Microscopia confocal e Eletrônica que vem trabalhando há vários anos, de maneira bastante produtiva, em programas de pesquisa conjuntos. Pretendemos com a colaboração de pesquisadores no Brasil e no exterior, viabilizar o projeto proposto. (AU)