Substratos e inibidores peptídicos para enzimas proteolíticas

Resumo

O projeto visa abordar o estudo de enzimas proteolíticas envolvidas em processos fisiológicos e fisiopatológicos desenvolvendo substratos e inibidores específicos. As calicreinas, renina, tonina, enzima conversora da angiotensina-I há vários anos são estudadas em nossos laboratórios e terão destaque no projeto. As peptidases do sistema nervoso central, enzimas de processamento de pró-enzimas, proteases de parasitas e venenos de serpentes e as catepsinas, serão estudadas em colaboração. Os peptídeos serão sintetizados na sua maioria por técnicas clássicas, em solução, pois serão acrescidos de radicais cromóforos, fluorescentes e apagadores da fluorescência. As sínteses de inibidores seguirão basicamente a mesma metodologia, requerendo, porém uma gama maior de reações orgânicas, pois deveremos preparar diazometilcetonas, cloro e fluorometilcetonas, aminoácidos e ligações amida modificadas. Os estudos cinéticos de hidrólise e inibição enzimáticas serão feitos por técnicas colorimétricas, fluorimétricas ou por HPLC. As enzimas serão obtidas de fontes naturais ou por clonagem, quando poderemos ter acesso a modificações puntuais, através da colaboração com a Dra. Julie Chao da Universidade de South Carolina, USA. Pretendemos estabelecer em nossos laboratórios as técnicas de preparo de glicopeptideos e estudá-las como inibidores ou substratos das enzimas proteolíticas. A química dos processos de síntese de glicoproteinas é recente e está em desenvolvimento a nível internacional. Pouco se conhece do efeito de açúcares na proteólise de substratos glicosilados. O potencial de trabalho é grande nesta área e totalmente novo em nosso meio. Deverá, portanto requerer investimentos em equipamentos, no desenvolvimento e adaptação de procedimentos químicos e no treinamento de pessoal. O projeto apresentado tem como suporte para sua execução um complexo de laboratórios e um corpo der pessoal que vem se dedicando na Escola Paulista de Medicina, à síntese e Biologia de peptídeos há pelo menos duas gerações. (AU)