Substratos e inibidores para enzimas proteolíticas

Resumo

O projeto abrange desenvolvimento de sínteses orgânicas voltadas aos peptídeos e aminoácidos direcionados ao estudo de proteases. Em vista da diversidade de enzimas proteolíticas que estaremos abordando e pelo envolvimento das mesmas em diferentes processos fisiológicos ou fisiopatológicos, teremos colaborações com 6 grupos nacionais e 16 internacionais. Estarão participando deste projeto no primeiro ano 8 estudantes de pós-graduação em nível doutorado 5 estudantes em nível de mestrado e 3 estudantes de iniciação científica. Baseados em nossas experiências anteriores, desenvolveremos peptídeos de fluorescência apagada internamente, com o par doador-aceptor de fluorescência orto-aminobenzóico (Abz) - N-[2,4-dinitrofenill-etilenediamina (EDDnp). As seguintes enzimas proteolíticas serão estudadas: calicreina tissular e plasmática, tonina de rato, trombina, catepsina G, proteases de veneno de cobra, tiol-proteases (catepsina B, de parasitas de moléstias tropicais), endooligopeptidases, metaloproteases (conversora da angiotensina I., 24.15, e 24. 11), convertases (Kex2, PC1, PC2, PC5/6 e furina), catepsina D. Incorporaremos aminoácidos não naturais e faremos alteração na cadeia peptídica para a obtenção de substratos e inibidores específicos para várias destas enzimas proteolíticas. Este projeto visa também o estudo de proteólise celular usando os substratos desenvolvidos assim como os inibidores. Além disso, estaremos estabelecendo um laboratório de cultura de células para estes fins, assim como cultivar as células que expressam as proteases de nosso interesse. Em decorrência das abordagens que fazemos com os peptídeos estaremos fazendo medidas físico-químicas com vários dos peptídeos a serem obtidos, com o objetivo de fazer algum paralelo entre a forma e a função dos mesmos na interação com as proteases. Outros programas estão ainda em análise e planejamento e que poderão ampliar este projeto: a) estudo sistematizado de endoproteaseses e exopeptidases de tubo digestivo de insetos dentro de uma perspectiva evolutiva; b) proteólise em processos germinativos em sementes de plantas e/ou apoptose; c) estudo de calicreinas de próstata humana a partir de peptídeos contendo a alça de serpinas que inibem estas enzimas; d) processamento de proteínas do capsídio do vírus da dengue por proteases do próprio vírus e por convertases da células hospedeira. (AU)