INTERAÇÃO LEPTOSPIRA-HOSPEDEIRO: I.Ação de proteases secretadas por L. interrogans sobre moléculas do plasma humano II.Caracterização do domínio SPOR da proteína MPL36 envolvida na interação com plasminogênio

Resumo

Bactérias do gênero Leptospira são espiroquetas que possuem estratégias eficientes para disseminação no hospedeiro. Os mecanismos subjacentes à entrada, disseminação, persistência e ao dano tecidual decorrentes da infecção por leptospiras patogênicas ainda são pouco conhecidos, mas estudos realizados por nosso grupo vêm mostrando que proteases extracelulares produzidas pela bactéria contribuem para as diversas etapas do processo de colonização. Ainda, dentre os fatores de virulência apresentados por leptospiras patogênicas estão as proteínas de membrana externa, elementos fundamentais na patogenicidade e na modulação da resposta imune do hospedeiro, particularmente aquelas com domínios expostos na superfície celular. Este projeto foi subdivido em 2 subprojetos. No subprojeto 1 pretende-se aplicar a degradômica para estudar os efeitos de proteases secretadas por leptospiras sobre moléculas do plasma humano. Dessa forma, o plasma será incubado com leptospiras ou com proteínas extracelulares secretadas pela bactéria. Os grupos N-terminais dos produtos de degradação serão inicialmente marcados utilizando a técnica TAILS (Terminal Amine Isotopic Labeling of Substrates) com o marcador isobárico TMT, reduzidos com DTT, alquilados com iodoacetamida e digeridos com tripsina. As amostras serão analisadas no espectrômetro de massas Orbitrap Exploris 480 acoplado ao nano-cromatógrafo líquido Vanquish Neo. Essa abordagem surge como uma alternativa promissora e desprovida de vieses em contraposição às metodologias clássicas, que pressupõem uma análise direcionada a um subconjunto de proteínas ou vias do hospedeiro selecionadas a priori. No subprojeto 2 pretende-se aprofundar o conhecimento sobre uma proteína de superfície de Leptospira, denominada MPL36, já descrita como uma molécula que interage com plasminogênio (Plg). Dados do grupo são sugestivos de que o domínio SPOR da MPL36 é a região responsável pela interação com Plg humano. Neste subprojeto pretende-se obter o domínio SPOR recombinante para comprovar sua interação com Plg, bem como avaliar as consequências funcionais dessa interação. Serão também realizadas comparações in silico com proteínas de outras bactérias (Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa) que apresentam o mesmo domínio. Essas análises poderão revelar aspectos relevantes para se compreender a função exercida por essas proteínas em diferentes bactérias. Estudos abrangendo a interface Leptospira-hospedeiro podem gerar conhecimento sobre alterações que acontecem no plasma envolvendo moléculas da imunidade inata, da cascata de coagulação e de outras vias, abrindo perspectivas para a identificação de novos substratos e para melhorar nossa compreensão sobre os mecanismos utilizados por esta bactéria para causar doença. (AU)